[发明专利]与长春新碱耐药性相关的microRNA分子miR-663a及其应用

说明书

本发明提供了一种与长春新碱耐药性相关的microRNA分子miR‑663a及其应用，属于基因工程与肿瘤生物治疗技术领域。本发明miR‑663a的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，其具有在长春新碱耐药细胞中高表达、在长春新碱敏感细胞株低表达的特性，可作为长春新碱耐药标志物，用于制备针对结肠癌长春新碱耐药辅助诊断试剂盒，还为设计结肠癌长春新碱耐药药物提供了新的靶点。本发明提供了该miRNA标志物在制备用于治疗结肠癌的长春新碱耐药性辅助诊断试剂盒、筛选新的结肠癌治疗药物方面的应用，以及该miRNA抑制剂在制备拮抗长春新碱耐药药物中的应用，具有较好的临床应用价值。

技术领域

本发明涉及基因工程与肿瘤生物治疗技术领域，具体地说涉及一种与长春新碱耐药性相关的microRNA分子miR-663a及其应用。

背景技术

结直肠癌是最常见的消化道恶性肿瘤之一，结直肠癌的发病率正逐年升高，其发病率仅次于食管癌、胃癌和肺癌等恶性肿瘤。长春新碱(vincristine,VCR)是目前具有广泛使用的抗肿瘤的化疗药物。然而，长期治疗可以使肿瘤细胞的对VCR产生耐药性，这是导致化学治疗失败的主要原因之一。数据显示，90％的癌症患者死亡与肿瘤的耐药性有关。

MicroRNA(miRNA)是一类内源性、高度保守、具有调控功能的非编码小分子RNA，长约20～25个核苷酸。已经发现与许多生命现象有关，如发育、分化和凋亡等，肿瘤发生也牵涉到miRNA表达水平的异常。此外，也有研究表明miRNA与肿瘤细胞对放化疗的敏感程度相关。miRNA可广泛参与发育周期、细胞增殖和分化、细胞凋亡、新陈代谢、神经调控、肿瘤发生以及病毒和宿主的相互作用等各种生理和病理的调控过程。细胞中基因片段拷贝数变异、插入、缺失及染色体数目异常等基因组稳定性异常现象均可引起一些miRNA的异常表达或调控。miRNA的突变、表达异常或加工修饰异常将影响miRNA的正常功能，导致目标基因的表达发生改变，影响肿瘤细胞的药物敏感性。

长春新碱在结肠癌的治疗过程中发挥着重要作用，但出现的耐药现象是限制其临床疗效的主要原因。明确新的micoRNA在结肠癌细胞长春新碱耐药中的生物学功能和机制为有效提高结肠癌的临床疗效提供新的生物靶标。

发明内容

本发明的目的在于提供一种与长春新碱耐药性相关的microRNA分子miR-663a及其应用。

本发明利用新一代高通量测序技术，结合生物信息学分析方法与实验验证，通过建立结肠癌长春新碱耐药细胞株，采用全基因组筛选的研究策略，运用HiSeq 2500测序技术和生物信息学的方法，检测和分析耐药细胞株的和非耐药的细胞株差异性表达的miRNAs，发现miR-663a在长春新碱耐药细胞中高表达。

本发明提供的一种与长春新碱耐药相关的microRNA分子，其为miR-663a，其核苷酸序列含有SEQ ID NO.1所示的序列。

本发明提供了含有miR-663a的生物材料，所述生物材料为载体、宿主细胞、转基因细胞系、工程菌。

本发明提供了miR-663a分子或含有其的生物材料在作为结肠癌长春新碱耐药标志物中的应用。

本发明提供了miR-663a分子或含有其的生物材料在制备结肠癌长春新碱耐药辅助诊断试剂盒中的应用。

上述应用中，所述microRNA分子在长春新碱耐药细胞中高表达。

本发明提供了miR-663a分子在筛选新的结肠癌治疗药物中的应用。

本发明提供了miR-663a分子的抑制剂在制备拮抗长春新碱耐药的药物中的应用。

本发明提供一种用于治疗结肠癌的药物，含有miR-663a分子抑制剂。

用于PCR检测miR-663a分子的特异性引物对属于本发明的保护范围。