[发明专利]以幽门螺旋杆菌23SrRNA基因的2142位点有突变为模板的阳性质控品

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物学技术领域，具体涉及一种以幽门螺旋杆菌23S rRNA基因的2142位点有突变为模板的阳性质控品，该阳性质控品用于验证幽门螺旋杆菌耐药基因检测试剂盒在应用于样本检测时样本是否为阳性的辅助判断。

背景技术

质控品是指用于体外诊断的质量控制物质，其具有已知浓度含量的目标检测物，为使人们确信某一产品或服务质量能满足规定的质量要求所必须的产品。质控品的使用目的是为了验证整个PCR反应过程具有准确性、有效性和特异性，并监控检测系统的状态。仪器在正式投入使用后，应定期对其校准，避免由于仪器原因导致的实验偏差。再次，在收到每批新试剂后，应首先对其进行预实验，确证新试剂质量后，再用于对临床标本的检测。

但是据申请人了解，目前在检测突变型幽门螺杆菌23S rRNA基因质量控制方面没有阳性质控品。

发明内容

本发明旨在提供一种以幽门螺旋杆菌23S rRNA基因的2142位点有突变为模板的阳性质控品，用于验证被检样本中幽门螺杆菌23S rRNA基因2142位点是否突变这一检测结果是否准确，解决了幽门螺杆菌23S rRNA基因的质量检测问题。

为达到上述目的，本发明采用的技术方案是：一种以幽门螺旋杆菌23S rRNA基因的2142位点有突变为模板的阳性质控品，该阳性质控品是一种以碱基序列为主要成分的试剂，该碱基序列包含幽门螺旋杆菌的23S rRNA基因2142位点有突变的基因片段，该基因片段为5’-GTCGGTTAAATACCGACCTGCATGAATGGCGTAACGAGATGGGAGCTGTCTCAACCAGAGATTCAGTGAAATTGTAGTGGAGGTGAAAATTCCTCCTACCCGCGGCAAGACGGGAAGACCCCGTGGACCTTTACTACAACTTAGCACTGCTAATGGGAATATCATGCGCAGGATAGGTGGGAGGCTTTGAAGTAAGGGCTTTGGCTCTTATGGAGCCATCCTTGAGATACCACCCTTGAT-3’，其中，带有下划线的碱基位点是幽门螺旋杆菌的23S rRNA基因的2142位点，用于表征2142变异型的幽门螺旋杆菌的23S rRNA基因的位点。

上述技术方案中的有关内容解释如下：

1、上述方案中，所述阳性质控品中还含有缓冲试剂，该缓冲试剂为pH 为7.6的Tris-Hcl缓冲液、纯化水以及pH 为8.0的TE缓冲液中的任意一种。

2、上述方案中，所述阳性质控品中含有的幽门螺旋杆菌23S rRNA基因2142位点有突变的基因序列是构建到质粒载体上保存，根据现有技术即可得到，质粒构建过程如下：

引物设计——pcr扩增——割胶回收DNA片段——构建载体——转化培养——阳性克隆鉴定——37℃摇床培养——质粒抽提——测序确认碱基序列。

抽提后的质粒再配制成所述阳性质控品，配制方法如下：

（1）配制稀释液：加入50%配方量的纯化水→加入Tris-Hcl缓冲液（pH7.6）→加入剩余的纯化水（涡旋震荡3次，每次5秒）→得0.002mol/L的Tris-HCl（pH 7.6）稀释液；

（2）HP质粒（2142位点突变）预稀释：加入50%配方量的稀释液→加入HP质粒（2142位点突变）溶液→加入剩余的稀释液（涡旋震荡3次，每次5秒）→得到X拷贝/微升HP质粒（2142位点突变）溶液；

（3）得到阳性质控品：加入50%配方量的稀释液→加入X拷贝/微升HP质粒（2142位点突变）溶液→加入剩余的稀释液（涡旋震荡3次，每次5秒）→得到阳性质控品。

本发明的特点以及有益效果是：所述阳性质控品实质是事先设计好的、当做已知浓度及碱基序列的样本，和其他被检样本（例如胃粘膜组织、胃液或牙菌斑）一起利用相关的幽门螺旋杆菌23S rRNA基因检测试剂盒进行检测，从而验证被检样本检测结果的准确性。也就是说，在利用幽门螺旋杆菌23S rRNA基因检测试剂盒检测被检样本时，本发明的阳性质控品相当于是一种已知浓度的阳性样本，用于验证幽门螺旋杆菌23S rRNA基因检测试剂盒的检测结果（即幽门螺杆菌23S rRNA基因上第2142位点变异这一检测结果）是否真实、有效，解决了幽门螺杆菌23S rRNA基因的质量检测问题。

附图说明

附图1为幽门螺旋杆菌菌群阳性及23S rRNA基因2142和2143位点无突变时的荧光定量PCR扩增熔解曲线图；