[发明专利]一种Au/DABT纳米探针及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明属于纳米材料分析检测技术，涉及一种纳米材料‐有机分子探针的设计与合成，特别涉及一种Au/DABT纳米探针及其制备方法和应用。

背景技术

一氧化氮是一种重要的生物体内信使和效应分子，在神经传递、免疫应答和心血管调节方面发挥着多样且至关重要的作用。19世纪80年代发现一氧化氮产生于内皮细胞，作为内皮舒张因子可引起血管平滑肌的舒张，进一步起到调节血压的作用。一氧化氮在体内主要来源于三种一氧化氮合酶(NOS)，分别是诱生型一氧化氮合酶(iNOS)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和神经元型一氧化氮合酶(nNOS)。体内过量或者不正常的NO浓度可能会是一系列病症的诱发原因，包括：癌症，内皮功能紊乱，或者神经退行性疾病如阿尔兹海默症和帕金森综合症。

由于一氧化氮在生物体内的重要作用，目前有很多研究一氧化氮的方法，如电化学检测法、化学发光法、分光光度法、荧光法、顺磁共振法等。这些方法易受到其他杂质的干扰，或存在较复杂的制样过程，较难实现对生物体内一氧化氮的检测。荧光法虽然可以实现对细胞内的检测，但是很容易受光漂白的影响。

应用表面增强拉曼光谱技术具有高灵敏性与高选择性及对生物样本无损伤等优点，日益受到人们的关注。传统的表面增强拉曼技术大多关注于平面增强基底的构建，应用于对物质的定性检测当中，而无法实现对细胞内的物质进行实时检测。基于纳米颗粒的表面增强拉曼光谱技术可以实现在液体中的定量检测和细胞中的定量检测，但是由于生物样品的环境复杂性，所以对探针的稳定性、灵敏性、选择性等有很高的要求。

发明内容

针对现有技术的上述缺陷，本发明提出了一种Au/DABT纳米探针及其制备方法，以纳米颗粒为基底，通过化学键将特异性响应分子DABT与纳米颗粒链接，制备得到Au/DABT纳米探针，本发明的方法操作简单方便、成本低，制备得到的Au/DABT纳米探针毒性小，对一氧化氮进行检测具有高稳定性、高选择性、高准确性和高灵敏度的优点。

本发明提供了一种Au/DABT纳米探针的制备方法，包括以下步骤：

(1)金纳米颗粒(AuHT纳米颗粒)的合成

十六烷基三甲基氯化铵、氯金酸和抗坏血酸在溶剂中进行还原反应，得到金纳米颗粒。

(2)DABT探针分子的合成

(2.1)4-氨基-3硝基苯硫酚的合成：在溶剂中，KOH和4-硫氰基-2-硝基苯胺进行水解反应，然后加入硫酸乙醇溶液，得到4-氨基-3硝基苯硫酚。

(2.2)3，4-二氨基苯硫酚的合成：在溶剂中，4-氨基-3硝基苯硫酚和连二亚硫酸钠进行还原反应，得到3，4-二氨基苯硫酚。

(3)Au/DABT纳米探针的合成

在溶剂中，步骤(2)制备的DABT和步骤(1)制备的AuHT纳米颗粒进行金硫键自组装，得到所述Au/DABT纳米探针。

步骤(1)中，所述还原反应的温度为0～30℃；优选地，所述还原反应在室温(25℃)下进行。

步骤(1)中，所述还原反应的时间为2～12小时；优选地，为4～6小时。

步骤(1)中，所述十六烷基三甲基氯化铵、氯金酸、抗坏血酸的摩尔比为50：3：10～20；优选地，为50:3:20。

步骤(1)中，所述溶剂选自水、乙醇、丙酮；优选地，为水。

步骤(1)中，溶液由无色透明变为浅紫色，反应结束有橘色沉淀生成；可选地，可以将反应溶液离心，沉淀经多次洗涤后再次溶于水溶液中，用于下一步反应。

步骤(1)中，优选地，将十六烷基三甲基氯化铵溶液和氯金酸混合后，快速加入新配置的抗坏血酸溶液，然后轻轻摇晃。

步骤(2.1)中，所述水解反应的温度为0-30℃；优选地，为10℃。

步骤(2.1)中，所述水解反应的时间为5～30min；优选地，为30min。

步骤(2.1)中，优选地，KOH溶于溶剂中，于10℃将4-硫氰基-2-硝基苯胺缓慢加入上述溶液中，然后在室温下进行水解反应。

步骤(2.1)中，所述KOH、4-硫氰基-2-硝基苯胺的摩尔比为35～70：9；优选地，为53：9。硫酸乙醇在该反应中的作用是中和作用。

步骤(2.1)中，所述溶剂选自水、乙醇、甲醇；优选地，为乙醇。

步骤(2.1)中，配置的所述硫酸乙醇的质量百分比为10％。

步骤(2.1)中，所述硫酸乙醇溶液的作用为调整溶液pH，发生复分解反应，合成4-氨基-3硝基苯硫酚。

步骤(2.2)中，所述还原反应的温度为90～130℃；优选地，为120℃。