[发明专利]对咽拭子样本或鼻咽拭子直接实时定量的PCR的方法在审
| 申请号： | 201710122152.2 | 申请日： | 2017-03-03 |
| 公开（公告）号： | CN106636446A | 公开（公告）日： | 2017-05-10 |
| 发明（设计）人： | 胡彬;刘杰;陶施芳;潘玲玲 | 申请（专利权）人： | 绍兴迅敏康生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 无锡市汇诚永信专利代理事务所(普通合伙)32260 | 代理人： | 张欢勇 |
| 地址： | 312000 浙江省绍兴市绍*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 咽拭子 样本 鼻咽 直接 实时 定量 pcr 方法 | ||
【权利要求书】：
1.对咽拭子样本或鼻咽拭子样本直接实时定量的PCR的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)制备裂解液和PCR反应液；
(2)将咽拭子样本或鼻咽拭子样本加入到含有步骤(1)中裂解液的PCR扩增管中，再加入磁珠到PCR扩增管中，振荡摇匀混合；
(3)将步骤(2)中的PCR扩增管在80-100℃高温处理10min后冷却到室温，然后在18-28℃反应5-10min；
(4)将PCR扩增管瞬时离心后放入到磁力架中，待磁珠吸附到磁力架一侧后将上清吸出；
(5)在PCR扩增管内加入配置好的PCR反应液，进行实时定量PCR反应；
所述步骤(1)中裂解液的成分为0-2M的NaCl、0-0.3％的Triton-X和0-0.2M的KCl。
2.根据权利要求1所述的对咽拭子样本或鼻咽拭子样本直接实时定量的PCR的方法，其特征在于所述步骤(3)中的高温为100℃。
3.根据权利要求1所述的对咽拭子样本或鼻咽拭子样本直接实时定量的PCR的方法，所述步骤(2)中咽拭子样本或鼻咽拭子样本与裂解液的体积比为1:3—1:10。
4.根据权利要求1所述的对咽拭子样本或鼻咽拭子样本直接实时定量的PCR的方法，所述磁珠为市售的核酸提取使用的且平均粒径为≤1000nm的单分散性羟基磁珠。
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