[发明专利]一组用于检测牛白血病病毒的引物及试剂盒

说明书

本发明涉及一组检测牛白血病病毒的引物及其试剂盒和检测方法，属于牛白血病病毒检测技术领域。本发明提供了一组用于检测牛白血病病毒的引物，包括外引物对、内引物对和环引物对；所述外引物对的序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示；所述内引物对的序列如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示；所述环引物对的序列如SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示。本发明提供的引物及其试剂盒和检测方法能够实现牛白血病病毒的高特异性、敏感性检测。

技术领域

本发明涉及牛白血病病毒检测技术领域，尤其涉及一组用于检测牛白血病病毒的引物及试剂盒。

背景技术

牛白血病是由牛白血病病毒引起的牛的一种慢性肿瘤性疾病。病的特征为淋巴样细胞恶性增生、进行性恶病质和全身淋巴结肿大，病死率高。目前用于牛白血病病毒检测的技术有电镜检测、血清学检测、分子生物学检测等。

但电镜检测操作繁琐，需要固定、脱干、垫入、分割和染色等一系列步骤，耗时相对较长。同时由于微生物种类繁多，有一定的主观性，对于操作人员要求较高，并且需要特殊仪器，不易在基层和大规模的检测。

血清学检测方法抗原上必须存在与所用抗体结合的抗原决定簇，使抗原抗体能够产生特异性的结合反应。基因突变，核苷酸相位改变等因素会导致某些位点的不表达或者结合位点的阻断，影响抗体与抗原的结合，造成假阴性结果。抗原抗体结合遵循一定的量比关系，只有当二者浓度比例适当时才出现可见反应，并且会受外界因素影响。操作过程中对样品要求较高，需要及时分离血清，溶血也会对结果造成不利影响。血清学实验的假阳性和假阴性是不能完全避免的，灵敏度并不高并且检测耗时长、操作复杂。

PCR是目前在病原检测中最常用的方法。但普通PCR和巢式PCR都需要结合琼脂糖凝胶电泳试验进行结果的判定，操作较为繁琐且耗时较长，无法达到快速检测的效果。实时荧光定量PCR对仪器要求较高，无法大规模的推广。

发明内容

本发明的目的在于提供一组用于检测牛白血病病毒的引物及试剂盒。本发明提供的检测牛白血病病毒的引物及试剂盒能够实现牛白血病病毒的高特异性、高灵敏度检测，操作简单、结果肉眼可测。

本发明提供了一组用于检测牛白血病病毒的引物，包括外引物对、内引物对和环引物对；所述外引物对的序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示；所述内引物对的序列如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示；所述环引物对的序列如SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示。

本发明还提供了一种基于上述技术方案所述引物的试剂盒，包括：8000U/mLBst2.0DNA聚合酶；5×Buffer；10mM dNTPs；上述技术方案所述引物；钙黄绿素荧光显色剂；牛白血病病毒阳性DNA模板；

所述5×Buffer包括：100mM且pH值为8.8的Tris-HCl、250mM的氯化钾、50mM的硫酸铵、40mM的硫酸镁和体积百分浓度为0.1％的吐温-20；

所述钙黄绿素荧光显色剂包括钙黄绿素和锰离子。

优选的是，100次规格的试剂盒包括2mL 5×Buffer，1.2mL上述技术方案所述引物；0.4mLBst 2.0DNA聚合酶，1.4mL 10mM dNTPs，0.4mL钙黄绿素荧光显色剂、0.4mL牛白血病病毒阳性DNA模板。

本发明提供了一组用于检测牛白血病病毒的引物。本发明提供的检测牛白血病病毒的引物能与牛白血病病毒保守区域的不同部位结合，特异性高，单个反应可扩增10个拷贝的牛白血病病毒。本发明的引物结合试剂盒应用在环介导恒温扩增反应中能够实现牛白血病病毒的高特异性、高灵敏度检测，操作简单、结果肉眼可测。

附图说明

图1为本发明实施例1提供的LAMP方法特异性检测结果图；