[发明专利]一种山豆根中黄酮类化合物的提取检测方法

说明书

本发明提供了一种山豆根中黄酮类化合物的提取检测方法，待检测的黄酮类化合物为lupinifolin和山豆根色满二氢黄酮C，分别简称为黄酮1和黄酮4；本发明创造性地将基质固相分散萃取技术和反向微乳毛细管电动色谱技术结合，采用离线富集和在线富集技术的联用实现山豆根中黄酮类化合物的二次富集，有利于其定量检测，且本发明在一个微量体系中实施，所用药材以及实验药品试剂均在微克级别，有害化学试剂使用量少，安全，经济，环保。

(一)技术领域

本发明公开了一种将分子筛基质固相萃取技术(MSPD)和反向微乳毛细管电动色谱(MEEKC)在线富集技术联用来提取分离山豆根药材中黄酮类化合物的分析检测方法，具体地说，它涉及由分子筛SBA-15作为吸附剂，结合基质固相萃取技术的离线富集和反向微乳场放大进样(FASI-MEEKC)的在线富集，旨在建立一种针对槐属植物中富含的具有异戊二烯基侧链的小极性游离型黄酮类化合物的分离分析方法。

(二)背景技术

山豆根为豆科蔓生性矮小灌木植物越南槐(Sophora tonkinensis Gagnep.)的干燥根及根茎，主产于广西、贵州。始载于《开宝本草》。药性苦寒，有毒。归肺、胃经。功效清热解毒，消肿利咽。近代临床常用于治疗咽喉肿痛、湿热黄疸以及心律失常等病症。研究表明，山豆根富含生物碱、皂苷、黄酮类及多糖等化合物，其中生物碱和黄酮为其主要化学成分。迄今为止，针对山豆根的研究大多集中于生物碱，忽略了山豆根中黄酮类化合物的研究和开发，目前对山豆根中黄酮类成分研究的文献报道很少，仅有的二十几篇相关文献主要针对山豆根中总黄酮的提取和鉴别、化学成分及药理毒性研究等。因此对山豆根中黄酮类化合物的研究非常有必要。

一方面，山豆根中的黄酮大部分是游离型，且具有异戊二烯基侧链，极性小，用HPLC分离耗时长，分离效果差。毛细管电泳技术具有多种分离模式，其中的微乳毛细管电动色谱(MEEKC)不仅分离范围广，可以同时分离水溶性、脂溶性、带电或不带电的物质，而且进样体积小(nL)、分析时间快、流动相用量少(mL)；另一方面，山豆根中黄酮类化合物化学组分结构比较复杂，种类多样且每种黄酮含量不高，用常用的HPLC分离方法难以实现完全分离和定量测定，而FASI-MEEKC能同时实现样品的在线分离和富集，提高其分析灵敏度。并且目前尚无MEEKC法在山豆根中黄酮类化合物中的应用研究，因此本发明具有一定创新性。

针对山豆根的样品前处理方法，目前主要集中在超声提取、回流提取等传统方法上，虽然简单易行，但提取时间长，提取效率低，大量有机溶剂的使用，不仅对实验操作人员身体有害，而且对环境污染严重。基质固相分散萃取技术(MSPD)是建立在固相萃取基础上的一种新型样品处理技术，为近年来国内外研究的一个热门领域，已经广泛地应用于水果、蔬菜、果汁等植物样本的农药残留检测领域。目前文献报道的基质固相分散萃取技术多采用弗罗里硅土、硅藻土、C₁₈反向硅胶、氧化铝等作为吸附剂，其药材量和吸附剂的量以及洗脱剂的用量较大，尤其洗脱剂用量在10mL以上，对环境会造成污染。分子筛作为新型基质固相分散萃取吸附剂，由于它孔径均匀、高比表面积、大孔体积、高吸附能力、强热稳定性等优点，使其在中药活性成分的提取检测方面有很好的应用前景。本发明以山豆根中黄酮类化合物为示范，将分子筛SBA-15引入山豆根中6种黄酮类化合物的提取中，可简化提取步骤，提高提取率，且可避免有机溶剂的残留。

综上，本发明建立了基于SBA-15的基质固相分散萃取技术结合FASI-MEEKC在线富集技术测定山豆根中黄酮类化合物的含量，以期为山豆根药材的含量测定和质量控制提供一种更加绿色、简便、快速、高效的新方法。

(三)发明内容

本发明创造性地将基质固相分散萃取技术和反向微乳毛细管电动色谱技术结合，采用离线富集和在线富集技术的联用实现山豆根中黄酮类化合物的二次富集，有利于其定量检测，且本发明在一个微量体系中实施，所用药材以及实验药品试剂均在微克级别，有害化学试剂使用量少，安全，经济，环保。