[发明专利]一种基于二氧化硅包覆金纳米三角的表面增强拉曼真菌毒素检测方法

权利要求书

1.一种基于二氧化硅包覆金纳米三角的表面增强拉曼真菌毒素检测方法，其特征在于：通过三步种子诱导法制得金纳米三角，在金纳米三角上标记DTNB信号分子，并包覆二氧化硅，制得金@DTNB@二氧化硅纳米三角拉曼增强基底，制备壳聚糖四氧化三铁磁性材料，在增强基底和磁性材料上修饰真菌毒素适配体，构建真菌毒素检测体系。

2.根据权利要求1所述的一种基于二氧化硅包覆金纳米三角的表面增强拉曼真菌毒素检测方法，其特征在于，采用三步金种子生长法制得边长为100±10nm，粒径均一的金纳米三角，通过在种子溶液和生长溶液中快速加入碘化钠来增加金纳米三角的产率。

3.根据权利要求1所述的一种基于二氧化硅包覆金纳米三角的表面增强拉曼真菌毒素检测方法，其特征在于，DTNB标记分子标记金纳米三角的最佳标记浓度为2mM，超声1h能够增加标记分子的连接，同时，将二氧化硅包覆在金纳米三角外，增强拉曼信号的稳定性。

4.根据权利要求1-3任一项所述的一种基于二氧化硅包覆金纳米三角的表面增强拉曼真菌毒素检测方法，其特征在于，该方法包括如下具体步骤：

步骤1)金@DTNB@二氧化硅核壳纳米三角的制备：采用三步种子生长法制得金纳米三角，将10mL上述制备的金纳米三角溶液在6000rpm，20min条件下离心两次，用去离子水清洗，除去过量的CTAC溶液，沉淀重新分散到10mL去离子水中，向上述溶液中加入20uL，0.01mol/L的DTNB乙醇溶液，室温下磁力搅拌2h；离心去除未连接的DTNB，重新分散到相同体积的去离子水中；将200μL，1mM的APTMS逐滴加入混合溶液中，反应15min后，将1mL质量分数为0.54％的硅酸钠加入溶液中，在90℃水浴环境下磁力搅拌30min，得到增强基底待用；

步骤2)真菌毒素核酸适配体链修饰的金@DTNB@二氧化硅核壳纳米三角的制备：将上述步骤1)制备的金@DTNB@二氧化硅核壳纳米三角冷却后加入100μL，1mM的APTMS，搅拌15min，离心分离后沉淀用乙醇和乙腈分别清洗三次，随后与溶解在乙腈溶剂中的0.6mL，0.2M三聚氯氰连续搅拌反应4h；此后，将产物进行离心，弃上层液体，获得的沉淀用乙腈、超纯水、硼酸盐缓冲液分别清洗3次，沉淀重新分散在5ml，pH＝8.4的BBS溶液中，将10μL，100uM的核酸适配体链的BBS溶液加入其中，室温下孵育12h；

步骤3)壳聚糖四氧化三铁磁性材料的制备：0.82g三氯化铁强烈搅拌下溶于40mL乙二醇中，强烈搅拌直至溶液变澄清，3.6g无水醋酸钠和0.5g壳聚糖，在连续搅拌条件下加入上述溶液，搅拌持续30min，反应结束后溶液转移到50mL聚四氟乙烯内衬的高压反应釜中，发应釜放在200℃恒温箱里反应12h，反应结束，冷却到室温，磁分离，乙醇清洗三次，60℃恒温箱干燥5h，产物密封放在4℃冰箱备用；

步骤4)真菌毒素核酸适配体链修饰的壳聚糖四氧化三铁磁性材料的制备：1mg上述步骤3)合成的壳聚糖四氧化三铁磁性材料超声分散在0.5mL，5％的戊二醛溶液中，0.5mL，5uM的氨基修饰的真菌毒素适配体链的PBS溶液加入上述混合溶液，室温孵育4h，反应结束后加入牛血清蛋白溶液封闭磁性材料上未连接的活性位点，上述溶液用2mL水和2mL，Tris-HCl缓冲溶液清洗，最终分散在1mL，Tris-HCl缓冲溶液中，备用；

5)表面增强拉曼检测体系的构建：在上述步骤4)合成的真菌毒素适配体修饰的壳聚糖四氧化三铁磁性材料100μL中加入100μL不同浓度的真菌毒素，室温下孵育2h，反应结束后，加入上述合成的真菌毒素适配体链修饰的DTNB三角溶液200μL，充分混合后室温下孵育6h，磁分离去除上清液，沉淀重新分散到100μL，Tris-HCl缓冲溶液中；用拉曼光谱仪在780nm激光激发下采集不同浓度真菌毒素组装体系的拉曼信号，从而建立组装体拉曼信号强度和对应真菌毒素浓度间的标准曲线。