[发明专利]用于苏木精-伊红染色的方法和成分

说明书

本发明提供当用于染色方案(protocol)、诸如苏木精‑伊红染色方案的某些点时有益于染色方案的特定成分的溶液。这些特定溶液的配方(fromulation)使得该溶液的带出不产生不利影响，或优选地稳定或有利地改性与该溶液进行接触的染色试剂溶液。在本发明的某些实施例中，溶液进行缓冲，以保持特定pH，使得当诸如带入到苏木精中的带出将不显著影响下一染色试剂的pH。

相关交叉申请

本发明主张2012年1月26日申请的美国临时专利申请No.61/591,181的优先权，其全文通过引用而包含于此。

背景技术

苏木精-伊红(“HE”)染色技术是组织样本病理学可视化的最常用的组织学技术。一般的HE染色系统由包括铝基苏木精(aluminum based hematoxylin)、伊红、分化液以及上蓝剂的溶液构成。苏木精是天然染料，当与铝离子络合时生成正电荷分子，该正电荷分结合到脱氧核糖核酸上，以引起细胞核紫色着色。分化液通常是弱酸性溶液，其通过从组织和载玻片中去除过量的背景染色来锐化染色载玻片的对比度。上蓝剂是一种pH呈碱性的溶液，该溶液被施加到染色样本时修饰结合的苏木精的结构，以引起鲜艳的蓝色/紫色着色。伊红是负电荷染料，其结合到细胞质和结缔组织中的正电荷蛋白质，以引起与细胞核的蓝色/或紫色着色截然不同的粉红色/橙色着色。

HE染色通常以“批量”方式进行，其中自动染色机通常包含一系列染色试剂容器并使用将载玻片/搁物架(rack)从一个容器连续移动到另一个的机械臂。通常，搁物架或保持器能够运载20-30个载玻片，但是，一些染色器械包含搁物架，每个搁物架保持更少或更多数量的载玻片，并且在至少一个染色机情况下，多个搁物架可以同时放置在染色器皿上。控制自动染色机的软件允许操作者对每个步骤的持续时间以及步骤的次序编程。虽然染色的批量方式是简单、经济并且相对快速，但是该技术具有一些缺点。

将载有载玻片的搁物架从一个容器运载到下一个容器的移动导致染色试剂或水的带出(carry-over)。由于染色试剂或水附着到载玻片、样品、载玻片搁物架等上，发生带出。因为带出可能以几种方式影响下游染色试剂的功能，所以不希望发生带出。带出会稀释溶液内的染料或功能试剂的浓度。带出和稀释液能通过改变溶剂的特性并且由此影响溶剂的诸如pH和离子强度的参数而影响染色试剂的功能。最后，带出可能将污染物引入到染色试剂中。通过这些机器操作时，带出对染色系统的性能、功能、稳定性、可预见性以及能力(capacity)产生不利影响。虽然一次带出可能导致这样的不利影响，但是，在多重染色试验(multiple staining runs)过程中，带出的不利影响尤其成为问题，因为不利影响由于重复的带出的累计影响而增强或放大。

由于带出的不利影响，当前染色系统中的试剂的能力或使用寿命非常不可预测的。经常在基于过去的经验而预定的使用量后改变试剂，或一旦试剂开始出现失效征兆或到达失效点时就更换试剂。因此，当前系统的溶液经常以不同速率、即以不同时间间隔改变。这增加了复杂性和低效率，因为染色频繁地停止，以改变一种或少于所有种类的溶液。另一方面，如果一次改变所有溶液，则由于抛弃一些仍然还具有可用的能力来处理额外的载玻片的溶液，因此浪费金钱。

一般尝试解决带出的不利结果已经涉及到频繁地定期或乃至于为每个试样使用新的溶液更换染色试剂。例如，如美国专利申请No.7,468,161和8,048,373中所述。另外，已经对个别化学试剂(苏木精、伊红、分化剂(differentiator)和上蓝缓冲剂(bluingbuffer))进行了改进，这可以延迟一些带出的影响。在至少一个例子中，已经尝试消除由于仪器(Dako CoverStainer)的机械设计而引起的带出影响。但是，由于带出导致的染色效果的不可预测性和减小仍然是主要的有待解决的问题。

发明内容