[发明专利]用于多重PCR的引物组合物在审
| 申请号： | 201710114770.2 | 申请日： | 2017-02-28 |
| 公开（公告）号： | CN108517354A | 公开（公告）日： | 2018-09-11 |
| 发明（设计）人： | 杨吉元;浦浩;刘建全 | 申请（专利权）人： | 上海茂槿生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6853 | 分类号： | C12Q1/6853;C12Q1/6869;C12N15/11;C12N15/10 |
| 代理公司： | 深圳舍穆专利代理事务所(特殊普通合伙) 44398 | 代理人： | 徐林茜;黄贤炬 |
| 地址： | 201815 上海市嘉*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 引物组合物 多重PCR 扩增 引物 特异性引物序列 多重PCR扩增 特异性扩增 引物二聚体 发夹结构 非特异性 均一性 双链 条带 外切 覆盖率 | ||
1.一种用于多重PCR的引物组合物，所述引物组合物由一对以上引物对组成，各引物对包括正向引物和反向引物，其中各引物包括5’端的形成发夹结构的序列和3’端的特异性引物序列。
2.如权利要求1所述的引物组合物，其中，
正向引物中形成发夹结构的序列不同于反向引物中形成发夹结构的序列。
3.如权利要求1所述的引物组合物，其中，
各正向引物中形成发夹结构的序列均相同，各反向引物中形成发夹结构的序列均相同。
4.如权利要求1所述的引物组合物，其中，
各引物中形成的发夹结构包括互补的15-25对碱基对，且包括由1-6个核苷酸形成的回折区。
5.如权利要求1所述的引物组合物，其中，
各引物中形成发夹结构的序列的GC含量为40-70％。
6.如权利要求1所述的引物组合物，其中，
正向引物中形成发夹结构的序列如SEQ ID NO:1所示，反向引物中形成发夹结构的序列如SEQ ID NO:2所示。
7.如权利要求1所述的引物组合物，其中，
正向引物中形成发夹结构的序列如SEQ ID NO:5所示，反向引物中形成发夹结构的序列如SEQ ID NO:6所示。
8.一种用于靶向测序的引物组合物，包括权利要求1-6中任一项所述的用于多重PCR的引物组合物以及一对通用测序引物对，其中所述通用测序引物对包括测序正向引物和测序反向引物。
9.如权利要求8所述的引物组合物，其中，
测序正向引物中的3’端序列与用于多重PCR的正向引物中形成发夹结构的3’端序列相同，测序反向引物中的3’端序列与用于多重PCR的反向引物中形成发夹结构的3’端序列相同。
10.一种多重PCR法，包括使用权利要求1-7中任一项所述的用于多重PCR的引物组合物，对DNA样本进行扩增，其中在PCR中使用具有双链5’-3’外切活性的DNA聚合酶。
11.如权利要求10所述的多重PCR法，其中，
具有双链5’-3’外切活性的DNA聚合酶为Taq DNA聚合酶。
12.一种靶向测序法，包括以下步骤：
(1)使用权利要求1-7中任一项所述的用于多重PCR的引物组合物，对DNA样本进行多重PCR扩增，其中在PCR中使用具有双链5’-3’外切活性的DNA聚合酶；
(2)使用一对通用测序引物，对多重PCR扩增产物进行扩增；
(3)对步骤(2)得到的PCR扩增产物进行测序。
13.如权利要求12所述的靶向测序法，其中，
所述通用测序引物对包括测序正向引物和测序反向引物，测序正向引物中的3’端序列与用于多重PCR的正向引物中形成发夹结构的3’端序列相同，测序反向引物中的3’端序列与用于多重PCR的反向引物中形成发夹结构的3’端序列相同。
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