[发明专利]一种血液细胞稳定剂及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及细胞保护剂技术领域，具体涉及一种能够保持血液成份形态、血液中细胞的表面抗原特性、细胞核的完整性和核酸稳定性的血液细胞稳定剂及其应用。

背景技术

全血样品采集时由于外周环境的温度、pH和氧气质量百分数发生了变化，血液离开人体后血小板会释放促凝因子，引起血液凝固，同时血液细胞也会由于环境的变化而丧失细胞的紧密度，从而死亡。这个过程中，血浆的各组分和血液中细胞成分的物理化学特性和生物标志物(包括蛋白、核酸、小分子等)也会发生改变，从而影响血液样本中具有诊断意义的检测结果。因此，稳定血液样品对于血样品的运输和临床试验流程的操作极为重要，必须对血液进行恰当的保存固定使得血液细胞呈现最好的状态。

保存血液的经典方法是全血样品采集时加入普通抗血液抗凝试剂后，6小时内(最多不超过12小时)需对血液进行分析或者其他处理。目前常见的抗凝试剂有EDTA，EDTA的主要用于螯合钙离子，阻止了许多的酶促反应而直接或者间接地防止了血液凝固。但是像EDTA这种常规的血液抗凝剂，对血液中的细胞没有保护作用：在加了抗凝剂的血液中细胞仍然会随着时间的推移而发生衰亡，不能保持血液细胞表面抗原的状态。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种血液细胞稳定剂及其应用，该血液细胞稳定剂使得血液中的血液成份和细胞能够保存192小时以上，并且无需低温处理，经处理的血液样品不会影响样品的后续分子检测，可广泛应用于血液样品中细胞成分的的免疫分析、核酸分析或蛋白质分析的相关实验。

为解决上述问题，本发明所采用的技术方案如下：

一种血液细胞稳定剂，其包括A液和B液，A液为用于维持细胞物理性质的保存液，B液为用于固定细胞的固定液；其中，A液包括以下质量百分数的组分：抗凝剂1～10％、磷酸酶抑制剂1～10％、蛋白酶抑制剂0.005～1％、水余量；B液包括以下质量百分数的组分：醛类聚合物0.1～5％、碱性盐0.1～5％、盐酸0.1～5％、水余量。

作为本发明优选的实施方式，所述血液细胞稳定剂的渗透压为320～400mOsm/kg、pH值为4.5～8。

优选地，所述抗凝剂选自EDTA、柠檬酸盐、氟化钾、肝素钠中的一种或任意两种以上的混合。

优选地，所述磷酸酶抑制剂选自氟化钠、原矾酸钠、甘油磷酸钠、焦磷酸钠、四咪唑盐酸盐中的一种或任意两种以上的混合。

优选地，所述蛋白酶抑制剂选自4-(2-氨乙基)苯磺酰氟、苯甲基磺酰氟、亮肽素、抑肽酶、胃蛋白酶抑制剂、EDTA-Na₂中的一种或任意两种以上的混合。

优选地，所述醛类化合物选自甲醛聚合物、乙醛聚合物或丙醛聚合物。

优选地，所述碱性盐选自氢氧化钠溶液或氢氧化钾溶液。

本发明还提供了上述血液细胞稳定剂在稳定血液细胞中的应用。

具体地，所述血液细胞稳定剂在使用前先将A液和B液混合15～120min，然后加入新鲜的血液中对血液细胞固定1～192h。

优选地，A液和B液按照0.5～2：0.5～2的比例混合。

相比现有技术，本发明的有益效果在于：

本发明所述的血液细胞稳定剂具有保护组织细胞、对蛋白质、酶等缓慢固定的化学物质，能够稳定血液细胞、保持血液细胞原有的形态、维持血液细胞原有的物理性质，能够很好地固定血液中的细胞，该血液细胞稳定剂使得血液中的血液成份和细胞能够保存192小时以上，并且无需低温处理，经处理的血液样品不会影响后续的样品分子分析，可广泛应用于血液样品中细胞成分的的免疫分析、核酸分析或蛋白质分析的相关实验。

附图说明

图1为本发明血液溶血实验中对照组于1h，24h，96h，192h的观察图；

图2为本发明血液溶血实验中实验组于1h，24h，96h，192h的观察图；

图3为本发明细胞完整实验中实验组MCF-7循环肿瘤细胞的FITC绿色荧光染色图；

图4为本发明细胞完整实验中实验组单组MCF-7循环肿瘤细胞的FITC绿色荧光染色图；

图5为本发明细胞完整实验中实验组MCF-7循环肿瘤细胞的细胞核DAPI染色图；

图6为本发明细胞完整实验中实验组白细胞的细胞核DAPI染色图；

图7为本发明细胞完整实验中实验组单个白细胞的细胞核DAPI染色图。

具体实施方式

下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步详细说明。