[发明专利]一种特异识别赭曲霉毒素的有机聚合整体柱及其制备方法

说明书

本发明公开了一种特异识别赭曲霉毒素的有机聚合整体柱及其制备方法，所述整体柱是先以环氧基环硅氧烷丙烯酸酯单体和丙烯酸酯交联剂聚合形成带有环氧基的支化结构的聚合整体柱固定相，再柱后开环加成，共价键合特异识别赭曲霉毒素的核酸适配体制得。本发明中核酸适配体与环氧基环硅氧烷聚合整体柱基质固定相表面支化分布的环氧基开环进一步加成，实现缩合偶联；所制备的聚合整体柱基质固定相具有环硅氧烷八元环型结构、支化分布环氧基，结构稳定，与5’‑氨基核酸适配体的作用位点多、位阻小，可实现对赭曲霉毒素A核酸适配体的高效键合，适用于赭曲霉毒素A的特异识别分离。

技术领域

本发明属于整体柱功能材料制备领域，具体涉及一种特异识别赭曲霉毒素的有机聚合整体柱及其制备方法。

背景技术

毛细管整体柱，是一类新兴的色谱微分离柱。目前，毛细管整体柱主要基于反相作用或亲水作用原理进行分离。在特异分析方面，亲和色谱柱利用固定于色谱固定相上的具有特异性识别功能的配体，使其与待分析物产生专一的相互作用，实现与样品中其他物质的分离。

分子印迹聚合物（MIP）由于其类似于“钥匙-锁”相互作用的识别原理，成为选择性整体柱材料研究的主要研究对象。由于分子印迹技术自身的特点，存在合成时材料消耗大、极性溶剂干扰、刚性识别“空穴”易被破坏或变形等不足，以及MIP 合成过程中不可避免地产生非特异性结合位点，导致其选择性与抗体抗原、酶底物等专一特异性生物识别体系相比存在较大差距。

核酸适配体具有稳定的二级结构和高特异性、高亲和力、便于化学修饰与功能化的特点，已成为一种广受关注的新型识别分子。核酸适配体的应用主要包括在化学研究检测系统中作为分子识别元件，在生物样品分离富集过程中作为能够与靶目标发生特异性结合的配基以及在医学上用于临床诊断和治疗。Chris Le等将适配体固定在毛细管中，用于蛋白质混合物中细胞色素C 的分离与检测，基于细胞色素C 的核酸适配体通过非共价键结合在有机聚合物整体柱基质上实现了对细胞色素C 和凝血酶的分离与检测。目前，基于不饱和烯基自由基聚合引入氨基链霉素，再与链接核酸适配体的生物素特征结合，核酸适配体修饰在一维碳链聚合结构上，形成的聚合物结构为一维结构低交联度形成的二维网状结构。构建高度交联立体结构的核酸适配体功能化聚合整体柱有待取得突破。

纳米复合材料是以聚合基体为连续相，将纳米尺寸的粒子或含有孔径的功能材料等分散相均匀分散于基体材料中，形成含有纳米尺寸材料的均一相复合体系。环四硅氧烷丙烯酸酯具有由-Si-O-交替连接的硅氧骨架组成的平面八元环型无机内核，平面八元环型环上拥有三个支化短链，链端含有环氧基团，通过这些支化结构上的环氧基团与功能试剂发生接枝或者聚合反应，可以实现分子层上的高度分散和功能化。引入环四硅氧烷丙烯酸酯，在八元环型上键合修饰核酸适配体功能分子，发展具有纳米孔穴的高度交联聚合结构的核酸适配体功能化整体材料，提供稳定的环状构型和高密度修饰的核酸适配体，可实现对特征生物样品的分离、富集和纯化。

发明内容

本发明的目的在于提供一种特异识别赭曲霉毒素的有机聚合整体柱及制备方法。所述整体柱是先以环氧基环硅氧烷丙烯酸酯单体和丙烯酸酯交联剂聚合形成带有环氧基的支化结构的固定相，然后开环加成，柱后修饰对赭曲霉毒素特异识别的核酸适配体；所述的环氧基环硅氧烷丙烯酸酯单体为2-羟基-3-{3-[2,4,6,8-四甲基-4,6,8-三(丙基缩水甘油醚)-2-环四硅氧烷]丙氧基}丙基甲基丙烯酸酯；所述的核酸适配体为5'-NH₂-C₆-GATCGGGTGTGGGTGGCGTAAAGGGAGCATCGGACA；所述的核酸适配体与环硅氧烷丙烯酸酯聚合物表面支化分布的环氧基开环进一步加成，实现缩合偶联；所制备的整体柱基质固定相具有环硅氧烷八元环型结构、支化分布环氧基，结构稳定，与核酸适配体的5’-氨基作用位点多、位阻小，实现对赭曲霉毒素A核酸适配体的高效键合。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：