[发明专利]一种人PD-L1蛋白高亲和性肽及其应用

说明书

本发明属于生物技术领域，具体为一种人PD‑L1蛋白亲和多肽及其应用。本发明肽的氨基酸序列为SEQ.ID.NO.1，SEQ.ID.NO.3和SEQ.ID.NO.4所示，或者为SEQ.ID.NO.1，SEQ.ID.NO.3和SEQ.ID.NO.4单次重复或多次重复的串联或分支的肽分子序列，其氨基酸序列为SEQ.ID.NO.5所示；该肽对人PD‑L1蛋白具有高亲和性，可以竞争性的阻断PD‑1/PD‑L1蛋白的亲和，阻断人体肿瘤的负调控耐受通路，活化免疫，提高T细胞对肿瘤细胞的杀伤力，达到治疗肿瘤的目的。本发明的肽在经过一定的修饰后可以作为药物，应用于肿瘤的治疗；同时也可作为检测试剂，用于定量、定性和定位检测各种生物样品和细胞PD‑L1蛋白的表达或存在。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种人PD-L1蛋白高亲和性肽及其应用。

背景技术

肿瘤是威胁人类健康的一种比较严重的疾病，且难以有效的预防。目前治疗肿瘤的方法主要有放疗、化疗和手术治疗等，但效果一般，手术后的5年生存率较低。开发出一种有效的治疗肿瘤的药物是当前肿瘤研究的热门课题。以抗PD-1/PD-L1为代表的免疫检测点疗法是近年来兴起的一种肿瘤治疗的全新手段，目前已经被FDA批准用于临床治疗的PD-1/PD-L1抗体类药物有三个，虽然都在一定程度上有效果，但也伴随着效率低、副作用及脱靶的表现。因此开发出一种高效、持久、具有广泛治疗作用的药物迫在眉睫。

采用化学的方法合成、纯化后得到目的多肽。采用ELISA的方法检测多肽与PD-L1蛋白的解离常数，并检测该多肽对PD-1/PD-L1信号通路的体外阻断作用；用流式细胞仪检测该多肽对肿瘤细胞表面表达PD-L1蛋白的亲和作用；最后再注射小鼠肿瘤动物模型，通过观察小鼠肿瘤大小的变化及生存时间的变化推断该多肽治疗肿瘤的潜在价值。

发明内容

本发明的目的是提供一种人PD-L1蛋白高亲和性肽及其在治疗肿瘤方面的应用。

本发明提供的人PD-L1蛋白高亲和性肽（记为PPLC），其氨基酸序列为SEQ.ID.NO.1所示，具有如下功能特征：①可与人PD-L1蛋白，测得解离常数可达0.75μM（解离常数表示一半受体被配体结合时配体的浓度，Kd值越小代表受体与配体的亲和性越高）；②可有效阻断PD-1/PD-L1蛋白的亲和；③可有效的和细胞表面表达的PD-L1蛋白结合；④注射接种肿瘤的动物，可有效抑制肿瘤的生长，延长动物生存时间。

本发明还提供编码所述人PD-L1蛋白高亲和性肽的基因（由相应氨基酸各简并密码子构成），其核苷酸序列为SEQ.ID.NO.2所示。

通过生物技术改造，本发明还获得了一系列序列不同，但是具有SEQ.ID.NO.1所示肽相同功能的肽序列，其序列主要包括：SEQ.ID.NO.3、SEQ.ID.NO.4。

本发明还提供一种同时含有PD-L1蛋白高亲和性肽氨基酸序列的SEQ.ID.NO.1，氨基酸序列为SEQ.ID.NO.3和氨基酸序列为SEQ.ID.NO.4的肽序列，为单次重复或多次重复的串联或分支的肽分子序列，及含有这些核心序列特征（同源性在70%以上）的分子，其肽氨基酸序列为SEQ.ID.NO.5所示。

本发明还提供一种经过生物和化学基团修饰的肽，其含有PD-L1蛋白高亲和性肽SEQ.ID.NO.1，SEQ.ID.NO.3和SEQ.ID.NO.4作为核心序列的C端（或N端，或侧链）基团上加抗原或药物或PEG修饰或其他分子基团共价修饰的结构特征分子。

本发明还提供一种经过修饰的肽，包括上述各种PD-L1蛋白高亲和性肽，其PD-L1蛋白高亲和性肽的加FITC等荧光基团修饰、同位素标记、化学发光基团或酶标试剂修饰的分子，用于检测PD-L1蛋白。

本发明还提供上述各种PD-L1蛋白高亲和性肽，在制备PD-L1蛋白拮抗剂中的应用。

本发明还提供上述各种PD-L1蛋白高亲和性肽，在制备PD-L1蛋白表达检测物和临床检测物中的应用。