[发明专利]YAP的用途

说明书

技术领域

本发明涉及生物医疗技术领域，尤其涉及YAP的用途。

背景技术

间充质干细胞是最初从骨髓中分化而来的多向分化潜能干细胞，可分化为多种不同种类的细胞，包括成骨细胞、软骨细胞、肌细胞以及脂肪细胞等。越来越多的证据证明间充质干细胞可存在于非骨髓组织中。多数成人的间充质干细胞可用于细胞介导的组织工程。源于骨髓、骨膜、以及脂肪组织等不同组织的间充质干细胞拥有相似的表面标记特征，但是不同组织来源的间充质细胞在分化、增殖以及迁移等方面存在着显著差异。在过去的几十年里，基于其干细胞的特性，一类新的干细胞从口腔颌面组织中分离出来，包括源于牙周膜、牙髓以及根尖乳头等组织的干细胞。这些细胞具有多向分化潜能、成骨/成牙本质分化及自我更新能力。将其移植到小鼠或小型猪体内，可以生成骨样/牙本质样矿化组织并具有修复牙体组织缺损的能力。相比较源于骨髓的间充质干细胞，这类干细胞更易获得，而且与牙体组织有着更紧密的联系。因此牙源性间充质干细胞为牙齿组织的再生提供了可靠的细胞来源，但是其成牙定向分化的分子机制尚未明确，限制了其潜在的应用。

YAP蛋白(Yes associated protein)是Hippo信号通路中一个起中心作用的开关蛋白，Yap作为一种基因转录共抑制因子，在维持干细胞自我更新及分化方面起着重要作用。然而，YAP在牙源性间充质干细胞中的作用及作用机制尚不明确。

发明内容

有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供提供YAP的用途，本发明研究表明，YAP基因能够调控通过调控与成骨、成牙相关基因的表达，实现对间充质干细胞成骨/成牙定向分化的调控。

本发明提供了YAP在制备调控间充质干细胞成牙相关基因表达的制剂中的应用。本发明实施例中，成牙相关基因为DSPP、DMP1和/或OSX。一些实施例中，所述间充质干细胞为根尖牙乳头间充质干细胞、脐带间充质干细胞或骨髓间充质干细胞。

本发明还提供了YAP在制备调控间充质干细胞内成骨相关基因的制剂中的应用。本发明实施例中，所述成骨相关基因为BSP和/或OSX。一些实施例中，所述间充质干细胞为根尖牙乳头间充质干细胞、脐带间充质干细胞或骨髓间充质干细胞。

本发明所述调控具体为：过表达YAP基因，抑制BSP基因、OSX基因、DSPP基因和/或DMP1基因的表达。敲除YAP基因，促进BSP基因、OSX基因、DSPP基因和/或DMP1基因的表达。

本发明所述YAP为YAP蛋白、YAP基因序列、能够过表达间充质细胞中YAP基因的物质，或者能够敲除间充质细胞中YAP基因的物质。

所述YAP基因核苷酸序列的登录号为GeneID:10413，所述YAP蛋白氨基酸序列有登录号为GeneID:10413的核苷酸序列翻译而来。

所述能够过表达间充质细胞中YAP基因的物质为包含YAP基因的表达载体；或者由包含YAP基因的表达载体转染的逆转录病毒。所述逆转录病毒的表达载体为pQCXIH。

所述能够敲除间充质细胞中YAP基因的物质为BAXR1的siRNA，序列为GCTTCAGGTCCTCTTCCTGAT。或者为将BAXR1的siRNA插入慢病毒的shRNA载体上构建而成BAXR1的shRNA质粒。

本发明实施例中，过表达根尖牙乳头间充质干细胞中的YAP基因，培养后以成骨诱导培养液诱导干细胞分化，2～3周后，在mRNA水平检测与成骨相关、成牙相关基因。结果表明，过表达YAP抑制根尖牙乳头间充质干细胞BSP基因、DSPP基因、OSX基因和DMP1基因的表达。结果中，所述抑制与未经过表达的正常根尖牙乳头间充质干细胞相比，具有显著性差异(p<0.05或p<0.01)。

本发明实施例中，敲除脐带间充质干细胞中的YAP基因，培养后以成骨诱导培养液诱导干细胞分化，2～3周后，在mRNA水平检测与成骨相关、成牙相关基因。结果表明，敲除YAP促进脐带间充质干细胞BSP基因、DSPP基因、OSX基因和DMP1基因的表达。结果中，所述促进与未经敲除的正常脐带充质干细胞相比，具有显著性差异(p<0.05或p<0.01)。

本发明实施例中，敲除骨髓间充质干细胞中的YAP基因，培养后以成骨诱导培养液诱导干细胞分化，2～3周后，在mRNA水平检测与成骨相关、成牙相关基因。结果表明，敲除YAP促进骨髓间充质干细胞BSP基因、DSPP基因、OSX基因和DMP1基因的表达。结果中，所述促进与未经敲除的正常骨髓充质干细胞相比，具有显著性差异(p<0.05或p<0.01)。