[发明专利]一种东革阿里组培快繁方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物的组织培养技术领域，尤其涉及一种东革阿里组培快繁方法。

背景技术

东革阿里(Eurycoma longifolia Jack)为苦木科(Simaroubaceae)东革阿里属(Eurycoma)灌木，长在东南亚近赤道的热带雨林中。树高4～6m，最高可达12m，树干直径8～10cm，最粗可达15cm。树枝几乎没有分叉，树叶长在顶部呈伞状。其根亦不分叉，入地最深可达2m。东革阿里主要分布于马来西亚、印度尼西亚和越南等东南亚国家，泰国、老挝、柬埔寨、缅甸、菲律宾及新加坡等也有零星分布。

东革阿里全株均可入药，药用部分主要来源于根部，在东南亚民间作为传统药材和滋补品已有数百年历史，既可作单味药、也可作药方中的重要配药。在马来西亚，东革阿里有马来人参之称，向来被当做产后滋补品、治疗糖尿病、高血压、前列腺炎、肺结核、发烧、黄疸病及痢疾。东革阿里含有多种生物碱，还能能够治疗疟疾、过敏症、发烧等病症，另外，它也含有多种元素可以抗癌、抗氧化、抗风湿等等，适合男女老少各年龄层的人士。东革阿里药效显著，是东南亚最珍贵的应用植物药之一，经济价值高，市场需求大。

东革阿里主要通过种子繁殖，种子发芽率低且萌发所需时间长，发芽后的植株生长缓慢，栽培2～3a才结少量果，成熟期5a以上，达到完全成熟期大概需要25a。可见，东革阿里通过种子繁殖远不能满足如今的市场需求，因此，组培养技术可作为一种提供东革阿里商业化种苗的有效方式。国内尚未见东革阿里组培快繁成功案例的相关报道，国外有关报道Hassan等(2012)通过腋芽已经成功建立了东革阿里的微繁体系，但存以下问题：①诱导时间长，种子开2周后才开始萌发。②增殖系数低，仅1.82左右。③增殖周期长，需要5～8周。④生根时间长，长达8周，生根率低，仅56％左右。⑤移栽成活率低，3周移栽成活率75％左右。鉴于此，本研究以东革阿里种子为外植体，进行组培快繁技术研究，建立了其高效组培快繁技术体系，达到诱导周期短、增殖芽健壮伸长生长快、增值率高、生根率高、生根苗健壮、移栽成活率高的目的。为其规模化周年生产提供了有效途径，具有重要的理论和应用价值。

发明内容

本发明的目的在于提出一种东革阿里组培快繁方法，该方法具有不定芽诱导快、增殖倍率高、生长快、生根率高、生根苗根系发达健壮、移栽成活率高、生产成本低等特点。

本发明所采用的技术方案：一种东革阿里组培快繁方法，包括如下步骤：

S1：外植体预处理:具体为将东革阿里种子浸泡后，剥去所述东革阿里种子的内外种皮，并保证胚的完整，得到预处理后的种子；

S2：外植体表面消毒：将所述预处理后的种子用酒精浸泡20～30s后，用无菌水冲洗2～3次，然后加入浓度为0.05％～0.1％的升汞溶液中浸泡3～4min后用无菌水冲洗5～6次，得到消毒后的外植体；

S3：芽诱导：将所述消毒后的外植体接入添加有6-BA 0.8～1.2mg/L、IBA 0.05～0.1mg/L、GA₃0～0.5蔗糖20～30g/L和琼脂6g/L的1/2改良MS培养基中进行芽诱导培养，得到芽诱导后的外植体；

S4：增殖培养：切下所述芽诱导后的外植体长度大于2cm的腋芽，将所述腋芽转接到增殖培养基培养，培养25～30d后分化形成新芽丛，将所述新芽丛中芽高≧3cm的幼嫩枝条切割成1.0～1.5cm的茎段，并将所述茎段转接入新的增殖培养基，经过反复继代增殖培养扩大繁殖得到增殖培养的芽丛；

S5：生根培养：从所述增殖培养的芽丛中切下芽高超过1.5cm的嫩茎，将所述嫩茎接入添加IBA1.5～2.0mg/L、蔗糖15～20g/L和琼脂6g/L的1/2改良MS培养基中生根培养20d后得到组培苗；

S6：炼苗与移栽：将所述组培苗移到温室中培养5～7d以便适应外界环境，再将所述组培苗的组培瓶盖从半开到全开炼苗1d后将组培苗取出，将组培苗移栽到泥炭土:珍珠岩:蛭石＝2:1:1混合基质上，移栽后7d内采用盖膜对组培苗保湿，最后揭开薄膜按常规幼苗管理。

优选的，步骤S2中，外植体表面消毒：将所述预处理后的种子用酒精浸泡20～30s后，用无菌水冲洗2～3次，依次加入新洁尔灭溶液浸泡、浓度为0.05％～0.1％的升汞溶液中浸泡3～4min后用无菌水冲洗5～6次，得到消毒后的外植体。

优选的，步骤S2中，所述酒精为体积百分比浓度70～75％的酒精；加入浓度为0.05％～0.1％的升汞溶液浸泡所述预处理后的种子时，不断摇动升汞溶液。