[发明专利]一种鉴别檀香紫檀和染料紫檀的微型DNA条形码及其鉴别方法和应用有效
| 申请号： | 201710103176.3 | 申请日： | 2017-02-24 |
| 公开（公告）号： | CN106929575B | 公开（公告）日： | 2018-06-29 |
| 发明（设计）人： | 焦立超;殷亚方;余敏;何拓;张永刚;姜笑梅 | 申请（专利权）人： | 中国林业科学研究院木材工业研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京和信华成知识产权代理事务所(普通合伙) 11390 | 代理人： | 胡剑辉 |
| 地址： | 100091 北京市*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 檀香紫檀 鉴别 紫檀 染料 应用 传统木材 高效可靠 木材经营 执法部门 质量检验 解剖 贸易 木材 检疫 海关 监管 | ||
1.一种鉴别檀香紫檀和染料紫檀的微型DNA条形码，其特征在于，所述微型DNA条形码为DNA序列ndhF-rpl32的部分序列，檀香紫檀的微型DNA条形码如SEQ ID No.1所示，染料紫檀的微型DNA条形码如SEQ ID No.2所示。
2.一种鉴别檀香紫檀和染料紫檀的分子方法，其特征在于：该方法是利用微型DNA条形码ndhF-rpl32序列差异，檀香紫檀的微型DNA条形码如SEQ ID No.1所示，染料紫檀的微型DNA条形码如SEQ ID No.2所示，并利用分子生物学的方法来鉴别檀香紫檀和染料紫檀。
3.如权利要求2所述的分子方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
(1)将木材样品研磨处理成木粉；
(2)提取步骤(1)所得木粉样品的DNA；
(3)以步骤(2)提取得到的DNA为模板，用PCR扩增引物扩增ndhF-rpl32序列中的作为微型DNA条形码用于鉴定的序列作为靶标；
(4)将步骤(3)得到的PCR扩增产物进行测序，并将测序产物分别与SEQ ID No.1和SEQID No.2进行比对后鉴别檀香紫檀与染料紫檀。
4.如权利要求3所述的分子方法，其特征在于，步骤(1)中所述木粉研磨至200目及以上。
5.如权利要求3所述的分子方法，其特征在于，步骤(2)中所述DNA需进行纯化，DNA终浓度为1-200ng/μL。
6.如权利要求3所述的分子方法，其特征在于，步骤(3)中所述PCR扩增的引物序列如SEQ ID No.7和SEQ ID No.8所示。
7.如权利要求3所述的分子方法，其特征在于，步骤(3)中所述PCR扩增反应体系为0.5-3U DNA聚合酶、1.0-2.0mM MgCl2、200μM单一dNTP、0.1-5.0μM单一引物、pH7.0-8.0的0.1-1.5mg/mL牛血清白蛋白和10-1000ng模板DNA；PCR反应条件为94-96℃预变性0.5-10min；94-96℃变性0.05-2min，40-65℃退火0.5-2min，72℃延伸0.3-2min，循环20-50次；72℃终延伸2-15min。
8.如权利要求3所述的分子方法，其特征在于，步骤(4)的鉴别标准为若测序产物与SEQID No.1序列一致或相似度为99％及以上，则该样品为檀香紫檀；若测序序列与SEQ IDNo.2序列一致或相似度为99％及以上，该样品为染料紫檀。
9.权利要求1所述微型DNA条形码，或权利要求2～8任意一项所述鉴别檀香紫檀和染料紫檀的分子方法在鉴别檀香紫檀和染料紫檀中的应用。
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