[发明专利]一种PC膜直接抗酸染色的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种微生物染色方法，尤其涉及一种PC膜直接抗酸染色的方法。

背景技术

在生物实验中，常常需要将特定微生物染色，以便检测其是否存在于样品中，以及数量统计等。现有的染色方法有痰涂片直接染色、夹层杯离心染色等，这些方法在染色时需要反复冲洗，抗酸菌很容易被冲洗掉，造成损失，影响镜检检出率。

另外，在取样涂片的过程，非常考验操作人员的经验，因为对样品进行液化和富集后，特定微生物容易聚集在某一位置，取样的位置不同，获得的涂片样品中特定微生物的数量随机性很大，从而影响涂片染色的准确率。

发明内容

本发明实施例所要解决的技术问题在于，提供一种PC膜直接抗酸染色的方法，可把抗酸菌富集在PC膜上，直接通过过滤后在PC膜上染色，不用进行冲洗步骤，不会造成抗酸菌的损失，能提高镜检准确率。

为了解决上述技术问题，本发明提供了一种PC膜直接抗酸染色的方法，包括以下步骤：

1) 将PC膜装在容器中，这个容器必须保证在过滤富集抗酸菌的过程中，密封性好，且不会造成PC膜变形；

2) 收集体液，使体液存留在PC膜上；

3) 将消化液加入到体液中，加入比例为消化液：体液=1:1到1:1.5，消化15-30min；

4) 改变PC膜上侧或下侧的气压，使PC膜上侧气压大于下侧气压，使PC膜上侧的液体从PC膜下侧过滤排出；

5) 往容器加入石碳酸复红染液，直到整张PC膜都被染液浸泡，浸泡15-30min；

6) 把石碳酸复红染液抽滤干净，加水，再抽滤干净；

7) 往容器中加适量的酸性酒精，抽滤干净；

8) 加水，抽滤干净；

9) 往容器中加亚甲基蓝染液，直到整张PC膜被染液浸泡，染色1-5min；抽滤干净；

10) 取PC膜直接采用合适的制片方式，100倍油镜下观察，抗酸菌染成红色，杂菌染成蓝色。

作为上述方案的改进，所述消化液为二硫苏糖醇（DTT）。

作为上述方案的改进，在步骤3）消化15-30min后，加入等体积的NALC-NaOH，震荡消化相同时间。

作为上述方案的改进，改变PC膜上侧或下侧的气压，使PC膜上侧气压大于下侧气压是指：在容器底部连接真空泵，将PC膜下侧空气抽出，从而使PC膜上侧气压大于下侧气压。

作为上述方案的改进，改变PC膜上侧或下侧的气压，使PC膜上侧气压大于下侧气压是指：在容器顶部连接真空泵，将空气压入PC膜上侧，从而使PC膜上侧气压大于下侧气压。

作为上述方案的改进，PC膜上侧和下侧的气压差为-30--70kPa。

实施本发明实施例，具有如下有益效果：

本发明提供的染色方法直接通过过滤后在PC膜上染色，不用进行冲洗步骤，不会造成抗酸菌的损失，也避免了挑选样品涂片而出现的随机性，能提高镜检准确率。

具体实施方式

为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明作进一步地详细描述。

实施例1

本发明实施例提供了一种PC膜直接抗酸染色的方法，包括以下步骤：

1) 将PC膜装在容器中，这个容器必须保证在过滤富集抗酸菌的过程中，密封性好，且不会造成PC膜变形；目的：保证PC膜的完整性和易于观察。

2) 收集痰液，使含抗酸菌的液体（下面以痰液为例）存留在PC膜上。

3) 将消化液加入到痰液中，所述消化液为二硫苏糖醇（DTT），加入比例为消化液：痰液=1:1，消化15min；目的：保证痰液完全被液化，易于过滤。

4) 在容器底部连接真空泵，将PC膜下侧空气抽出，从而使PC膜上侧气压大于下侧气压，PC膜上侧和下侧的气压差为-70kPa，使PC膜上侧的液体从PC膜下侧过滤排出；目的：富集抗酸菌。

5) 往容器加入石碳酸复红染液，直到整张PC膜都被染液浸泡，浸泡15min。目的：保证抗酸菌染成红色。

6) 把石碳酸复红染液抽滤干净，加水，再抽滤干净。

7) 往容器中加适量的酸性酒精，抽滤干净；目的：把杂菌及PC膜上的石碳酸复红染料洗脱干净。

8) 加水，抽滤干净；目的：减少酸性酒精对复染染色的影响。

9) 往容器中加亚甲基蓝染液，直到整张PC膜被染液浸泡，染色2min。抽滤干净。