[发明专利]一种基于均相反应系统的糖基化蛋白样品预处理方法

权利要求书

1.一种基于均相反应系统的糖基化蛋白样品预处理方法，其特征在于该方法为：将水溶性的金纳米簇材料溶解到去离子水中形成均相反应系统，利用该均相反应系统对酶解后的糖基化多肽进行富集，最后加入体积比乙腈：三氟乙酸为99:1的溶液将水溶性的金纳米簇材料与糖基化多肽进行“共沉淀”以及分离处理；

所述的水溶性的金纳米簇材料是一种以半胱氨酸为保护基团合成的金纳米簇材料，或用其他的水溶性的金属团簇材料，

所述其他的水溶性的金属团簇材料为谷胱甘肽以及聚乙二醇(PEG)作为保护基团的金纳米簇材料；

该方法的具体过程如下：

1)在离心管中配置0.3-0.6mg/mL的金纳米簇材料的水溶液；

2)将步骤1)中的水溶液常温下超声1-2min使其完全形成均匀的溶液体系；

3)向步骤2) 的溶液体系中加入0.8-1.2mg/mL糖基化蛋白酶解液，金纳米簇材料的水溶液与糖基化蛋白酶解液的体积比为10-30:1，震荡90-120s实现糖肽的富集；

4)向步骤3)中以滴加的方式加入沉淀液，使沉淀液与金纳米簇材料水溶液的体积比为6-10:1，将材料从体系中分离出来；所述沉淀液为体积比乙腈：三氟乙酸为99:1的溶液；

5)将步骤4)中得到的材料溶解到水中，使金纳米簇材料的浓度为0.3-0.6mg/mL，震荡；

6)重复步骤4)和步骤5)，次数为1-3次；

7)将步骤6)中得到的材料分散到洗脱液，使金纳米簇材料的浓度为0.6-1.2mg/mL，从而将保留在水溶性的金纳米簇材料上的糖基化肽洗脱下来以便于后续的质谱检测。

2.根据权利要求1所述的基于均相反应系统的糖基化蛋白样品预处理方法，其特征在于所述洗脱液为体积比H₂O：乙腈：三氟乙酸为69.9：30：0.1的溶液。