[发明专利]一种人重组组织因子及其基因、表达载体、宿主菌和表达方法

说明书

技术领域

本发明涉及蛋白质工程技术领域，具体而言，涉及一种人重组组织因子及其基因、表达载体、宿主菌和表达方法。

背景技术

凝血酶原时间(PT)是外源性凝血系统常用筛选试验之一，是指在缺乏血小板的血浆中加入过量的组织因子和Ca²⁺后，使凝血酶原转变为凝血酶，后者使纤维蛋白原转变为纤维蛋白，血浆凝固所需要的时间即为PT。

组织因子(TF)，是一种完整的膜糖蛋白。TF作为非酶类的蛋白辅助因子，可以与血液凝结因子FVIIa(blood-coagulation factor VIIa)互作形成TF-FVIIa复合体启动外源性凝血过程。人的TF蛋白是由263个氨基酸组成，包含三个结构域：胞外结构域(1-219)，跨膜结构域(220-242)和胞内结构域(243-263)。胞外结构域的功能主要是结合并激活FVIIa启动外源凝血过程。TF与FVIIa的相互作用是钙离子依赖的，而且TF-FVIIa复合体对FIX和FX的蛋白酶解过程是膜依赖的，跨膜结构域主要就是将TF蛋白锚定细胞膜上，对组织因子的生物活性非常重要，而胞内结构域主要起到信号转导的作用。理论上TF蛋白的胞外结构域和跨膜结构域两者就有了启动外源性凝血过程的全部功能。

现有的技术表达的人组织因子存在生产工序复杂，活性低于正常糖基化的组织因子；而且异源表达系统存在密码子偏好影响蛋白的表达；也同样会影响蛋白的活性。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种人重组组织因子，具有较高的生物活性。

本发明的第二目的在于提供编码上述的人重组组织因子的基因。

本发明的第三目的在于提供含有上述基因的表达载体。

本发明的第四目的在于提供含有上述基因的宿主菌。

本发明的第五目的在于提供一种人重组组织因子的表达方法，可以快速高效的获得具有较高生物活性的人重组组织因子。

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

一种人重组组织因子，该组织因子的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

编码上述的人重组组织因子的基因。

含有上述基因的表达载体。

含有上述基因的宿主菌。

一种人重组组织因子的表达方法，其包括：

将上述的基因克隆到第一载体，获得第一克隆载体；

酶切第一克隆载体并转化到宿主细胞，获得表达菌株；

培养表达菌株并用诱导剂诱导表达菌株表达组织因子。

与现有技术相比，本发明的有益效果为：本发明提供人重组组织因子，具有较好的生物活性；通过表达载体连接表达人重组组织因子的目的基因在宿主菌种中表达，可以快速的、高效的获得大量的组织因子，人重组组织因子的表达效率更高，活性也更高。提供的组织因子的表达方法，操作步骤简单，操作简便，反应条件温和，方便简洁；有利于大量的获得人重组组织因子。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。

图1为本发明实施例3提供的pPIC9K载体示意图；

图2为本发明实验例2提供的标准曲线示意图。

具体实施方式

下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

下面对本发明实施例的一种人重组组织因子及其基因、表达载体、宿主菌和表达方法进行具体说明。

20世纪初期，Schmid与Moranitz首次发现了组织中血液凝固的启动因子，并将其命名为组织因子(Tissue factor，TF)。到20世纪80年代，组织因子被证实是生理性凝血过程中最重要的启动因子。人们借助重组DNA、人工致突变及基因剔除等现代分子生物学技术，进一步在分子水平和基因水平研究TF，发现TF与全身炎症反应综合症及休克、DIC、血栓性疾病、移植排斥反应、恶性肿瘤等的发生、发展有着密切关系，近年来又研究发现TF还具有参与愈伤组织修复、新生血管形成及胚胎发育等多种生理功能。因此，组织因子在生物制药领域有着良好的应用发展前景。