[发明专利]一种双靶标细胞膜色谱柱及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种双靶标细胞膜色谱柱及其制备方法和应用，属于色谱科学、细胞生物学及受体药理学领域。该方法将两种不同受体类型的细胞分别制备成细胞膜色谱固定相，再将两种细胞膜色谱固定相混合均匀，得到两种受体类型的混合固定相，最后将混合固定相湿法装柱，构成双靶标细胞膜色谱柱。本发明制备的双靶标细胞膜色谱柱在保持原有细胞膜色谱柱活性识别和色谱分离特性的基础上，增加了活性识别的位点，能够识别复杂体系中“单组分单靶标”、“单组分双靶标”及“多组分双靶标”的目标组分，为多元药物的开发提供新的技术手段，并显著提高复杂体系中目标组分的筛选效率。

技术领域

本发明属于色谱科学、细胞生物学及受体药理学等领域，涉及一种双靶标细胞膜色谱柱及其制备方法和应用。

背景技术

细胞膜色谱是一种有效的从复杂体系中直接筛选识别目标组分的新技术。但由于中药具有多组分、多作用靶点的特殊性，单靶标细胞膜色谱柱在对复杂体系中目标组分进行筛选时，可能忽略同一组分与不同受体作用，对于不同组分与不同受体作用的筛选效率较低。

双靶标细胞膜色谱柱在保持原有单靶标细胞膜色谱柱活性识别和色谱分离特性的基础上，增加了同时活性识别两种不同靶标的可能性，对复杂体系中“单组分双作用靶标”及“多组分双作用靶标”目标组分的发现提供了新方法，为多元药物的开发提供了新技术手段。

但目前关于双靶标细胞膜色谱柱及其制备方法等技术还鲜有报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种双靶标细胞膜色谱柱及其制备方法和应用，该双靶标细胞膜色谱柱在保持原有细胞膜色谱柱活性识别和色谱分离特性的基础上，增加了活性识别的位点，对复杂体系中“单组分双作用靶标”及“双组分/多组分双作用靶标”成分的发现提供了新方法，为多元药物的开发提供了新的技术手段。

为达到上述目的，本发明采用的技术方案为：

一种双靶标细胞膜色谱柱，所述双靶标细胞膜色谱柱中填充有双靶标细胞膜色谱固定相，所述双靶标细胞膜色谱固定相是由两种不同受体的细胞膜色谱固定相混合而成的，所述两种不同受体的细胞膜色谱固定相是由两种表达不同受体类型的细胞的细胞膜分别包裹大孔硅胶制成的。

所述两种不同受体的细胞膜色谱固定相，一种是由高表达IgE受体的RBL-2H3细胞的细胞膜包裹大孔硅胶制成的，另一种是由高表达MrgprX2受体的LAD2细胞的细胞膜包裹大孔硅胶制成的。

所述两种不同受体的细胞膜色谱固定相，一种是由利用基因工程技术构建的高表达EGFR受体的HEK293细胞的细胞膜包裹大孔硅胶制成的，另一种是由利用基因工程技术构建的高表达FGFR4受体的HEK293细胞的细胞膜包裹大孔硅胶制成的。

所述的双靶标细胞膜色谱柱在筛选识别单组分单靶标、单组分双靶标以及多组分双靶标的目标组分方面的应用。

所述的双靶标细胞膜色谱柱在筛选识别药物中致敏组分及潜在致敏组分方面的应用。

所述的双靶标细胞膜色谱柱在筛选识别复杂体系中抗血管生成抑制剂方面的应用。

所述的双靶标细胞膜色谱柱的制备方法，包括以下步骤：

1)分别培养两种表达不同受体类型的细胞，当培养的两种细胞计数分别不低于10⁷个时，去除培养基，分别获得两种细胞；

2)将获得的两种细胞分别用Tris-HCl混悬后置于细胞超声破碎仪中进行破碎，然后通过差速离心分离出两种细胞的细胞膜；

3)用PBS缓冲液将两种细胞的细胞膜分别配制成两种细胞膜悬液，在真空条件下将两种细胞膜悬液分别加入到已预先活化的大孔硅胶内，搅拌均匀后静置过夜，得到两种不同受体的细胞膜色谱固定相；