[发明专利]成纤维细胞的培养基及其制备方法

说明书

本发明涉及一种诱导性多能干细胞诱导成成纤维细胞的培养基及其制备方法。该培养基包括基础培养液和添加物，所述基础培养液为体积比为1:0.5～2的H‑DMEM培养液和F12培养液；以在所述基础培养液中的浓度计，所述添加物包括如下组分：非必须氨基酸、谷氨酰胺衍生物、胰岛素、氢化可的松、转铁蛋白、亚硒酸钠、成纤维细胞生长因子、雌二醇、黄体酮、8‑溴环磷腺苷、人卵泡刺激素。该培养基能够获得较现有技术更高的成纤维细胞分化概率，并且能够稳定传代，提高细胞的增殖速度，为皮肤组织工程提供成纤维细胞的种子细胞来源，同时整个过程没有用到血清，有效的避免了动物源性病原体带来的风险，提高了临床应用的安全性。

技术领域

本发明涉及细胞培养基，特别是涉及一种成纤维细胞的培养基及其制备方法。

背景技术

皮肤组织工程是近几年的研究热点。但是皮肤的相关细胞都属于终末分化细胞，很难在体外进行大规模的培养扩增，同时种子细胞的来源问题也阻碍了皮肤组织工程的发展。

由于自体的种子细胞来源有限，异体的种子细胞存在排斥反应，干细胞又存在伦理问题，因此从尿液中收集尿液细胞，将尿液细胞重编程为诱导性多能干细胞(ips细胞)，ips细胞再诱导成为角质形成细胞、成纤维细胞、汗腺细胞、毛乳头细胞等，即可解决皮肤组织工程的种子来源问题，且从尿液中获得细胞，方便快捷，不用通过创伤获取，来源广泛。

但是，目前的采用的将ips细胞诱导成为成纤维细胞的培养基，如MEF培养基的分化概率较低，难以满足实际需求，且含有血清，会带来动物源性病原体风险，影响临床应用的安全性。

发明内容

基于此，有必要提供一种不含血清，安全性高，且提高诱导性多能干细胞向成纤维细胞分化比例的成纤维细胞的培养基。

一种成纤维细胞的培养基，包括基础培养液和添加物，所述基础培养液为体积比为1:0.5～2的H-DMEM培养液和F12培养液；以在所述基础培养液中的添加量计，所述添加物包括如下组分：

在其中一个实施例中，所述添加物包括如下组分：

在其中一个实施例中，所述添加物还包括抗生素。

在其中一个实施例中，所述抗生素包括在所述基础培养液中添加量为0.05～0.2mg/mL的青霉素以及在所述基础培养液中添加量为0.05～0.2mg/mL的链霉素。

在其中一个实施例中，所述添加物还包括自由基清除剂。

在其中一个实施例中，所述自由基清除剂为在所述基础培养液中添加量为0.05～0.2mmol/L的β-巯基乙醇。

本发明还提供所述的成纤维细胞的培养基的制备方法，包括如下步骤：

按所述体积比混合H-DMEM培养液和F12培养液，得所述基础培养液；

将所述胰岛素、氢化可的松、转铁蛋白、亚硒酸钠、非必需氨基酸、谷氨酰胺衍生物、成纤维细胞生长因子、雌二醇、黄体酮、8-溴环磷腺苷，人卵泡刺激素添加至所述基础培养液中，即可。

本发明还提供所述的成纤维细胞的培养基在成纤维细胞培养中的应用。

本发明还提供一种将诱导性多能干细胞诱导为成纤维细胞的方法，包括如下步骤：

采用mTeSR1培养基对诱导性多能干细胞进行培养，当汇合度为75～85％时，消化为单细胞；

取适量所述单细胞，以EB拟胚体形成培养基进行培养，形成拟胚体；

将所述拟胚体接种至所述培养基中培养，即得成纤维细胞。