[发明专利]铅离子环境污染中直接竞争酶联免疫检测试剂盒及其应用

说明书

本发明提供了一种基于直接竞争酶联免疫法铅离子检测试剂盒，包括：包被有羊抗鼠IgG二抗的检测板，所述检测板真空密封包装；所述羊抗鼠IgG二抗的包被浓度为50～200μg/mL；质量浓度为20～50μg/mL的酶标Pb‑ITCBE鳌合物半抗原；质量浓度为10～20μg/mL的抗铅离子单克隆抗体溶液；所述抗铅离子单克隆抗体溶液由Pb‑ITCBE‑cBSA免疫原免疫Balb/C小鼠制备而来；1.0～3.0mol/L的终止液；样品稀释液；底物显色液；洗涤液；铅离子标准品溶液；质量浓度为10～20mg/mL的EDTA处理液。本发明提供试剂盒具有灵敏度高、特异性强的特点，同时具有检测时间短的优点。

技术领域

本发明属于环境检测技术领域，具体涉及铅离子环境污染中直接竞争酶联免疫检测试剂盒及其应用。

背景技术

微量铅元素是有机体必需的金属微量元素之一。随着人类对铅的开采、冶炼、加工及商业制造的增多，大量的铅以不同的形式进入自然界，并随着生物链的传递而进入生物圈。由于铅具有生物放大效应和不易被代谢转移等特点，不仅污染了水源、大气和土壤，也严重威胁人类和动物的安全。1938年，英国学者首次报道牧草中铅的含量过高，可使放牧羊产生以剧烈腹泻和被毛褪色为特征性症状的铅中毒症，称之为“Teart”病。

在我国，铅和精炼铅产量居世界第三位，主要用于蓄电池制造、颜料、合金等行业。1923年开始在汽油中加入铅用作抗爆剂以后，更加速了全球性铅的污染。铅具有高蓄积性与多亲和性，可通过消化、呼吸等途径被机体吸收，对人体无任何生理功能。急性铅中毒表现为胃疼、头疼、颤抖和神经性烦燥，严重时导致昏迷，甚至死亡。慢性铅中毒大多表现为神经毒性，对血液系统、免疫系统、泌尿系统等造成一定的损害。铅是对儿童威胁最大的环境污染物之一，儿童对铅元素较成年人敏感，由于血脑屏障没有发育完整，婴幼儿的血铅水平达到100μg/L便可引起认知功能障碍或发育迟缓。鉴于铅污染和危害性较大，我国制定了土壤、食品、水体、玩具等涉铅领域的国家标准。农产品质量安全要求无公害水产品(GB18406，4-2001)对铅含量限定在≤0.5mg/kg，地下水质量标准(GB/T14848-93)中规定，集中式生活饮用水水源及工农业用水的铅离子限量为≤0.5mg/L，熟肉制品(GB2725-2005)中要求铅含量≤0.5mg/kg。

目前动物性食品及环境水样中Pb²⁺污染的主要检测方法包括传统的理化检验和免疫学检验两种类型的方法。理化检验包括紫外分光光度法(UV)、电化学分析法、原子吸收光谱法(AAS)、电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)、电感耦合等离子体原子发射光谱法(ICP-AES)、氢化物发生-原子荧光光谱法(HG-AFS)和中子活化分析法(NAA)等，它们是目前Pb²⁺污染检测的主要方法，灵敏度高，结果准确，但由于需要昂贵的仪器设备、熟练的专业人员、烦琐费时、周期长、费用高、不能现场操作、样品筛检量小等缺陷，其应用受到了限制。免疫学检验方法是以抗原抗体分子的特异性、可逆性反应为基础的分析技术，包括荧光偏振免疫测定法(FPIA)、酶联免疫吸附测定法(ELISA)KinExA免疫测定法(KIA)、胶体金免疫层析试验测定法(GICA)和微悬臂梁免疫传感器(MIS)等，由于抗原抗体的结合具有高度的选择性和敏感性，这一技术具有简便、快速、敏感、特异、经济、筛检量大等优势，代表着重金属离子检测的发展方向。目前，国内外重金属铅离子污染免疫检测技术研究非常活跃，其中公告号为CN103472230B的专利公开了一种检测铅离子的间接竞争酶联免疫试剂盒及其制备方法，其检测灵敏度为10.31ng/mL，并且检测时间较长。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种基于直接竞争酶联免疫法检测铅离子试剂盒及其应用，使所述试剂盒具有检测时间短的优点，同时具有灵敏度高、特异性强的特点。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种基于直接竞争酶联免疫法铅离子检测试剂盒，包括：