[发明专利]细菌性荚膜多糖的纯化方法有效
| 申请号： | 201710098943.6 | 申请日： | 2017-02-23 |
| 公开（公告）号： | CN107043431B | 公开（公告）日： | 2020-06-30 |
| 发明（设计）人： | 祝先潮;陈春光 | 申请（专利权）人： | 上海瑞宙生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C08B37/00 | 分类号： | C08B37/00 |
| 代理公司： | 上海翼胜专利商标事务所(普通合伙) 31218 | 代理人： | 翟羽 |
| 地址： | 201210 上海市浦东*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 细菌性 荚膜 多糖 纯化 方法 | ||
1.细菌性荚膜多糖的纯化方法，其特征在于，包括如下步骤：
（1）灭活剂处理肺炎链球菌发酵培养液，得到包含有细胞碎片、蛋白质、核酸和多糖的细菌溶解液；
（2）在步骤（1）获得的细菌溶解液中加酸调节pH值至3.0~6.5，沉淀杂质，离心和微滤去除沉淀物获得多糖澄清液，所述酸是磷酸、乙酸、盐酸、硫酸或硝酸中的一种或几种；
（3）用截留分子量10—100KDa的膜对步骤（2）获得的多糖澄清液进行超滤换液并浓缩，获得去除大部分可溶性蛋白质、核酸以及大颗粒杂质含量的荚膜多糖溶液；
（4）将步骤（3）获得的荚膜多糖溶液组合使用复合型离子交换层析和羟基磷酸灰质盐层析进行色谱层析，获得纯化的荚膜多糖溶液；所述的组合使用是指先使用复合型离子交换层析，后使用羟基磷酸灰质盐层析或者先使用羟基磷酸灰质盐层析，后使用复合型离子交换层析；所述复合型离子交换层析填料选自Capto Adhere、TOYOPEARL MX-Trp-650M、Cellufine MAX AminoButyl，所述羟基磷酸灰质盐层析为CHT™ CeramicHydroxyapatite；
（5）浓缩及超滤步骤（4）获得的荚膜多糖溶液，并进行无菌过滤、保存。
2.根据权利要求1所述的细菌性荚膜多糖的纯化方法，其特征在于，步骤（2）中微滤所用微滤膜的膜孔径为0.22，0.45，0.65，1.0 um 中的任意一种。
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