[发明专利]一种枯草芽孢杆菌的新型培养方法在审
申请号: | 201710097165.9 | 申请日: | 2017-02-22 |
公开(公告)号: | CN106834178A | 公开(公告)日: | 2017-06-13 |
发明(设计)人: | 麻林涛;王莉 | 申请(专利权)人: | 麻林涛 |
主分类号: | C12N1/20 | 分类号: | C12N1/20;C12R1/125 |
代理公司: | 暂无信息 | 代理人: | 暂无信息 |
地址: | 100071 北京市丰台区*** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 枯草 芽孢 杆菌 新型 培养 方法 | ||
1.一种枯草芽孢杆菌的培养方法,所述方法包括如下步骤:
S1:配制第一液体培养基;
S2:配制第二液体培养基;
S3:菌种培养得到第一培养液;
S4:继续培养得到第二培养液,从而完成所述培养方法。
2.如权利要求1所述的培养方法,其特征在于:所述步骤S1具体如下:
S1-1:分别称取如下的基础物:微量元素水溶液40-50ml、维生素E 1-2g、苏氨酸300-400mg、L-脯氨酸200-300mg、葡萄糖3-4.5g、蔗糖2-4g、琼脂5-6g、蛋白胨6-8g、酵母浸膏1.5-3g、10-12g大豆粉和牛肉膏3-5g;
S1-2:将上述基础物加入到去离子水中,充分搅拌,并用去离子水定容至1000ml,即得到所述第一液体培养基。
3.如权利要求2所述的培养方法,其特征在于:其中,所述微量元素水溶液是将4g硝酸锌、3.5g硫酸锌、3g硝酸镁、1g氯化钴、2g硝酸铜、2.5g氯化钙、4g氯化锰、8g氯化亚铁和3g氯化铁充分溶解于1000ml蒸馏水中而得到的。
4.如权利要求1-3任一项所述的培养方法,其特征在于:所述步骤S2具体如下:
S2-1:同权利要求2中的所述步骤S1-1;
S2-2:将所述基础物和25-40ml无机物混合液加入到去离子水中充分搅拌,并用去离子水定容至1000ml且调节pH值为6.4-7.2,即得到所述第二液体培养基。
5.如权利要求4所述的培养方法,其特征在于:其中,所述无机物混合液是将5g Na2SO4、2g NaCl、12g K2HPO4、4g Na3PO4、7g NH4Cl、2.5g硼酸、3g KNO3和5g KI加入到1000ml蒸馏水中充分搅拌溶解而得到的。
6.如权利要求4-5任一项所述的培养方法,其特征在于:其中,步骤S2-2中将pH值调节为6.4-7.2,最优选为6.8。。
7.如权利要求1-6任一项所述的培养方法,其特征在于:所述步骤S3具体如下:
将枯草芽孢杆菌菌株进行斜面试管培养,得到枯草芽孢杆菌菌落,然后使用接种环接1环接种于120ml所述第一液体培养基中,于温度T1和转速为140-160转/分钟下振荡培养30-34小时,从而得到所述第一培养液;
其中,温度T1为35-37℃。
8.如权利要求1-7任一项所述的培养方法,其特征在于:所述步骤S4具体如下:
按照1.5-1.9:100的体积比,将所述第一培养液接种于所述第二液体培养基中,并降温至温度T2,然后以160-170转/分钟的速度搅拌并通风,培养18-22小时,从而得到所述第二培养液。
9.如权利要求8所述的培养方法,其特征在于:其中,温度T2为28-32℃,且优选T1-T2为5-7℃,最优选T1-T2=6℃。
10.如权利要求8-9任一项所述的培养方法,其特征在于:其中,通风的通风比为1:0.7-0.8。
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