[发明专利]一种枯草芽孢杆菌的新型培养方法

权利要求书

1.一种枯草芽孢杆菌的培养方法，所述方法包括如下步骤：

S1：配制第一液体培养基；

S2：配制第二液体培养基；

S3：菌种培养得到第一培养液；

S4：继续培养得到第二培养液，从而完成所述培养方法。

2.如权利要求1所述的培养方法，其特征在于：所述步骤S1具体如下：

S1-1：分别称取如下的基础物：微量元素水溶液40-50ml、维生素E 1-2g、苏氨酸300-400mg、L-脯氨酸200-300mg、葡萄糖3-4.5g、蔗糖2-4g、琼脂5-6g、蛋白胨6-8g、酵母浸膏1.5-3g、10-12g大豆粉和牛肉膏3-5g；

S1-2：将上述基础物加入到去离子水中，充分搅拌，并用去离子水定容至1000ml，即得到所述第一液体培养基。

3.如权利要求2所述的培养方法，其特征在于：其中，所述微量元素水溶液是将4g硝酸锌、3.5g硫酸锌、3g硝酸镁、1g氯化钴、2g硝酸铜、2.5g氯化钙、4g氯化锰、8g氯化亚铁和3g氯化铁充分溶解于1000ml蒸馏水中而得到的。

4.如权利要求1-3任一项所述的培养方法，其特征在于：所述步骤S2具体如下：

S2-1：同权利要求2中的所述步骤S1-1；

S2-2：将所述基础物和25-40ml无机物混合液加入到去离子水中充分搅拌，并用去离子水定容至1000ml且调节pH值为6.4-7.2，即得到所述第二液体培养基。

5.如权利要求4所述的培养方法，其特征在于：其中，所述无机物混合液是将5g Na₂SO₄、2g NaCl、12g K₂HPO₄、4g Na₃PO₄、7g NH₄Cl、2.5g硼酸、3g KNO₃和5g KI加入到1000ml蒸馏水中充分搅拌溶解而得到的。

6.如权利要求4-5任一项所述的培养方法，其特征在于：其中，步骤S2-2中将pH值调节为6.4-7.2，最优选为6.8。。

7.如权利要求1-6任一项所述的培养方法，其特征在于：所述步骤S3具体如下：

将枯草芽孢杆菌菌株进行斜面试管培养，得到枯草芽孢杆菌菌落，然后使用接种环接1环接种于120ml所述第一液体培养基中，于温度T1和转速为140-160转/分钟下振荡培养30-34小时，从而得到所述第一培养液；

其中，温度T1为35-37℃。

8.如权利要求1-7任一项所述的培养方法，其特征在于：所述步骤S4具体如下：

按照1.5-1.9:100的体积比，将所述第一培养液接种于所述第二液体培养基中，并降温至温度T2，然后以160-170转/分钟的速度搅拌并通风，培养18-22小时，从而得到所述第二培养液。

9.如权利要求8所述的培养方法，其特征在于：其中，温度T2为28-32℃，且优选T1-T2为5-7℃，最优选T1-T2＝6℃。

10.如权利要求8-9任一项所述的培养方法，其特征在于：其中，通风的通风比为1:0.7-0.8。