[发明专利]酚酞半抗原、人工抗原及其制备方法

说明书

本发明涉及生物技术领域，特别涉及酚酞半抗原、人工抗原及其制备方法。本发明半抗原在保留酚酞基本结构的基础上引入连接臂结构和用于偶联大分子的活性基团，这样既有利于其与大分子偶联，又可以在偶联后充分暴露本身分子结构和分子量较小的酚酞基本结构，避免了其被大分子掩蔽而影响动物机体的识别。本发明通过活性酯化法将半抗原与蛋白质偶联制备人工抗原，偶联比可达18.2，可用于酚酞的免疫检测。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及酚酞半抗原、人工抗原及其制备方法。

背景技术

酚酞(Phenolphthalein)，3,3-双(4-羟基苯基)-1(3H)-异苯并呋喃酮，可作用于肠平滑肌，使肠蠕动增加，同时又能抑制肠道内水分的吸收，使水和电解质在结肠蓄积，产生缓泻作用，临床常用于治疗习惯性顽固性便秘。其作用缓和，很少引起肠道痉挛。但酚酞具有一定的不良反应，包括：由酚酞引起的过敏反应临床上罕见，偶能引起皮炎、药疹、瘙痒、灼痛及肠炎、出血倾向等。禁忌症包括阑尾炎、直肠出血未明确诊断、充血性心力衰竭、高血压、粪块阻塞、肠梗阻。药物过量或长期滥用时可造成电解质紊乱，诱发心律失常、神志不清、肌痉挛以及倦怠无力等症状。

近年来，减肥类中药或保健品中非法添加酚酞以达到临床的疗效的新闻屡见报道。如果患者在长期不知情的情况下服用含有酚酞的中成药或保健品会引起严重的副作用。因此，急需开发快速准确的酚酞检测手段和方法用于监管执法和科学研究。目前，检测中成药或保健品中是否含有酚酞成分，采用的是传统的检验方法，须将提取的样品带回实验室进行大型仪器分析耗时长，成本高。

免疫分析是一种基于抗原抗体特异性识别和结合反应的分析方法，具有灵敏、对仪器要求不高、操作简单、成本低等优点。酚酞属于分子量小于1000的小分子化合物，本身不具备反应性和免疫原性，为了实现酚酞的免疫检测，不仅需要合成具备高效价的酚酞抗原，而且还需要筛选特异性强、敏感度高的酚酞单克隆抗体。但是目前尚未有有关酚酞单克隆抗体的相关报道。对于技术人员来说高效价的酚酞抗原的设计仍是难点。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了酚酞半抗原、人工抗原及其制备方法。本发明半抗原在保留酚酞基本结构的基础上引入连接臂结构和用于偶联大分子的活性基团，这样既有利于其与大分子偶联，又可以在偶联后充分暴露本身分子结构和分子量较小的酚酞基本结构，避免了其被大分子掩蔽而影响动物机体的识别。本发明通过活性酯化法将半抗原与蛋白质偶联制备人工抗原，偶联比可达18.2，可用于酚酞的免疫检测。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种酚酞半抗原，其分子结构式如式I或式II所示：

其中，n为1、2或3，m为1、2或3。

本发明还提供了式I所示酚酞半抗原的制备方法，包括如下步骤：

酚酞与脂肪类二胺反应，得到酚酞半抗原；

脂肪类二胺为乙二胺、丙二胺或丁二胺。

本发明还提供了式II所示酚酞半抗原的制备方法，包括如下步骤：

酚酞与脂肪类二胺反应，得到氨基化酚酞；

氨基化酚酞与环状酸酐反应，得到酚酞半抗原；

脂肪类二胺为乙二胺、丙二胺或丁二胺；

环形酸酐为丁二酸酐、戊二酸酐或己二酸酐。

作为优选，酚酞与脂肪类二胺反应的温度为120～130℃，反应的时间为12～14h。

优选地，酚酞与脂肪类二胺反应的温度为130℃，反应的时间为12h。

作为优选，酚酞与脂肪类二胺的质量比为1：(4～10)。