[发明专利]老年骨质疏松性骨折的血清microRNA诊断标志物及其诊断试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种老年骨质疏松性骨折的血清microRNA诊断标志物，还涉及一种老年骨质疏松性骨折的血清microRNA诊断试剂盒。

背景技术

老年性骨骼退行性改变常常引起骨质疏松症，严重的骨质疏松常可导致骨折的发生，不仅增加了患者的经济负担，并且降低了其生活质量，甚至缩短了寿命。目前用于评估骨质疏松性骨折风险的方法有骨密度检测、FRAX、OSTA等。尽管骨密度、FRAX等方法目前还是骨质疏松性骨折风险预测的主要方法，但其作为临床检测的局限性正在不断显现。骨密度检测依赖各种X线设备，不仅有一定的辐照，而且难以有效地降低患者的检测成本；FRAX及OSTA等在线工具虽然简便快速，但精确度较低，更多地作为家庭自我评估的工具，难以作为临床诊断的参考；血清生化标志物作为骨质疏松性骨折标志物虽然有了一定的应用，但临床缺乏完善的取样、分析质控体系，以及健全的参考数据库，目前并未得到充分应用。随着骨折风险评估研究的不断深入，现有骨折风险评估方法的局限性正在不断凸显。

因此，寻找用于老年性质疏松性骨折风险评估的标志物，不仅有助于完善现行的骨折风险评估方法，也对骨质疏松早期诊断和预防骨折发生、提高老年人群的生活质量有重要的意义。

循环microRNA是一类血液来源的～22nt内源性非蛋白编码RNA，可参与包括骨代谢在内的多种生理和病理学过程。中国航天员科研训练中心李英贤等人发明了一种用于骨质疏松的诊断的血液检测试剂盒，该发明通过对人血清中miR-214的研究发现，miR-214的水平与腰椎骨密度的T值呈明显的正相关，miR-214的水平与骨吸收速率的敏感指标Ⅰ型胶原羧基端(CTX)的量呈明显的负相关。但经检测，miR-214在成骨细胞高表达的小鼠血清中的含量与野生型小鼠相比，并未发生改变，即血清中miR-214水平与骨组织中miR-214水平无相关性。因此，仍不能直接根据人血清中的表达量的多少判定是否患有骨质疏松症。(李英贤，凌树宽，李琦。一种用于骨质疏松的诊断的血液检测试剂盒[P].北京：CN104694639A，20150610)

综上所述，基于现有的技术和方法，一方面缺少直接用于预警或诊断老年性骨质疏松性骨折的诊断标志物，即缺少将骨组织来源的microRNA与血清中microRNA结合起来，筛选老年性骨质疏松性骨折的诊断标志物。另一方面，在实际应用过程中，几种诊断标志物的联合使用会提高诊断的特异性与灵敏度。针对老年性骨质疏松性骨折的诊断试剂盒的研发迫在眉睫。

发明内容

为了克服现有老年骨质疏松性骨折的血清microRNA诊断试剂盒灵敏度差的不足，本发明提供一种老年骨质疏松性骨折的血清microRNA诊断标志物及其诊断试剂盒。所述microRNA生物标志物为hsa-miR-497-5p、hsa-miR-1290、hsa-miR-4299、hsa-miR-181c-5p、hsa-miR-320a或hsa-miR-204-3p中的一种或者hsa-miR-181c-5p和hsa-miR-4299的组合，或者hsa-miR-497-5p和hsa-miR-1290的组合。所述标志物及其引物能够用于诊断试剂盒，用于老年骨质疏松性骨质的诊断，该试剂盒灵敏度高。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：一种老年骨质疏松性骨折的血清microRNA诊断标志物，其特点是：包括hsa-miR-497-5p、hsa-miR-1290、hsa-miR-4299、hsa-miR-181c-5p、hsa-miR-320a或hsa-miR-204-3p的任一种或者任几种组合，所述标志物用于老年骨质疏松性骨折诊断试剂盒中的诊断标志物。

一种老年骨质疏松性骨折的血清microRNA诊断试剂盒，其特点是：包括用于扩增上述诊断标志物的引物，以及从血清中提取microRNA的试剂，其中所述用于扩增上述标志物的引物为反转录引物和cDNA的扩增引物，以及内参基因5S的上游引物序列和下游引物序列。

上述的诊断试剂盒用于老年骨质疏松性骨折的诊断。

其中，上述的试剂盒中hsa-miR-497-5p，hsa-miR-1290，hsa-miR-4299，hsa-miR-181c-5p，hsa-miR-320a，hsa-miR-204-3p的反转录引物序列分别为：

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