[发明专利]一种干眼动物模型的建立方法

说明书

技术领域

本发明属于医用动物模型技术领域，具体涉及一种干眼动物模型的建立方法。

背景技术

干眼是指由于泪液质和量及动力学的异常而导致泪膜不稳定和/或眼表面的异常，并伴有眼部不适症状的一类疾病。干眼可以分为：蒸发过强型干眼、水液缺乏型干眼、粘蛋白异常型干眼、泪液动力学异常型干眼及混合型干眼。临床调查显示，干眼是目前常见的眼表疾病，并可继发引起角膜炎、角膜新生血管以及角膜溃疡等，严重影响人们的生活质量和工作效率。干眼发病的共同病理生理特征有眼表上皮屏障破坏、泪液减少、结膜杯状细胞减少、眼表上皮鳞状上皮化生等。由于干眼发病机制复杂且具有多样性，目前关于干眼的发病机制、诊断和治疗的一系列基础以及临床问题尚有待进一步深入研究。

动物模型的建立是研究干眼的发病机制，探索治疗方法的有效且实用的手段。目前已经报道的干眼动物模型的建立方法包括：通过营养因素、环境因素、毒性物质、药物作用、改变动物性激素分泌水平、去除泪腺或眼表的神经支配、诱导泪腺产生自身免疫反应、手术摘除泪腺以及转基因动物等。这些干眼动物模型的建立往往需要较高的技术条件或较长的时间，并且变异性较大。不同动物模型的使用均具有一定的局限性，与临床实际情况有一定差距。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术缺陷，提供一种干眼动物模型的建立方法。

本发明的技术方案如下：

一种干眼动物模型的建立方法，其所用装置包括一盒状本体和一盖设在盒状本体上的上盖，盒状本体内装有适量对鼠类不产生化学损害的液体，液体的深度不超过鼠类的体长，液面以上设有供鼠类站立的至少一支撑杆；上盖上设有一固体食物放置区和一喂水区，以供鼠类正常饮食；具体包括如下步骤：

(1)将鼠类实验动物放在支撑杆上，盖好上盖，放置固体食物和饮用水，并定期更换所述液体；

(2)使上述鼠类实验动物在该装置中每天站立1～24h，站立的时间即为睡眠剥夺时间，站立结束后将该鼠类实验动物放入普通饲养笼中休息，休息期间保持安静，避免打扰鼠类实验动物休息，连续重复该步骤1～100d，即可得干眼动物模型。

在本发明的一个优选实施方案中，所述支撑杆的横截面为圆形，直径为0.01～10cm。

在本发明的一个优选实施方案中，所述支撑杆的材质为木质、竹制、塑料、铁质或不锈钢。

在本发明的一个优选实施方案中，所述支撑杆相对所述盒状本体固定。

在本发明的一个优选实施方案中，所述液体为水。

进一步优选的，所述液体为普通自来水、纯水或超纯水。

在本发明的一个优选实施方案中，所述液面于支撑杆的距离为1～5cm。

在本发明的一个优选实施方案中，所述步骤(1)的定期更换的时间为1～2d。

本发明的有益效果：

1、本发明让鼠类实验动物站在离水面较近的支撑杆上，动物需要用一定的脚握力才能在支撑杆上保持平衡，在动物进入快速动眼睡眠时，全身肌紧张性下降，随即从支撑杆上滑落，使得面部沾到或浸到支撑杆下方的水面而突然惊醒，此行为可反复发生，选择性破坏了动物的快速动眼睡眠，造成睡眠剥夺。

2、本发明制作简单，可重复性高，模型稳定。

3、本发明建立的干眼动物模型可以严格控制睡眠缺乏的时间，利于干眼病程的研究，且诱导因素单一可控，可避免其他影响因素对实验结果产生影响。

4、本发明在模型诱导过程中，模型动物逐渐出现眼表上皮屏障破坏的特征性改变：包括角膜上皮细胞减少(通过HE染色、荧光素钠着色等方法证明)、细胞排列紊乱、细胞连接减少(通过细胞连接标志物的免疫组织化学等方法证明)、上皮细胞增殖能力降低(通过细胞增殖能力标志物的免疫组织化学等方法证明)。

5、本发明在模型诱导过程中，模型动物结膜上皮细胞、角膜上皮细胞逐渐出现鳞状上皮化生的病理学特征改变：包括细胞正常分化标志物如结膜上皮特异性标志物角蛋白K19表达降低，并出现异常分化标志物的阳性表达，如皮肤上皮细胞特异性标志物角蛋白K10的表达。

6、本发明在模型诱导过程中，模型动物结膜上皮细胞中的杯状细胞逐渐减少，可以用特异性标志物MUC5AC免疫组织染色证实。

8、本发明在模型诱导过程中，模型动物角膜上皮细胞表层出现凋亡细胞，且其数量逐渐增加。

9、本发明在模型诱导过程中，模型动物水性泪液分泌随时间延长而逐渐减少。