[发明专利]基于DNA产生电信号及其自组装放大信号的电化学适配体传感器测定HER2的方法

权利要求书

1.基于DNA产生电信号及其自组装放大信号的电化学适配体传感器测定HER2的方法，其特征在于：包括以下步骤：

1)将金电极表面活化处理后，修饰HER2特异性多肽，再采用巯基己醇封闭；

2)在所述金电极表面滴加HER2标准溶液，使HER2与其特异性多肽结合，再将HER2适配体修饰在电极上，形成夹心结构；再利用HER2适配体包含的小段DNA触发两条互补的单链DNA在所述金电极表面进行自组装形成双链DNA；再在所述金电极表面滴加Na₂MoO₄溶液进行反应，烘干，对金电极通过方波伏安法进行测试，得到峰电流值；

3)取一系列不同浓度的HER2标准溶液，按步骤2)进行操作，得到与各浓度的HER2标准溶液相对应的峰电流值，建立HER2浓度与峰电流值的标准曲线；

4)将HER2待测溶液替换步骤2)中的HER2标准溶液，按步骤2)进行操作，得到峰电流值，再根据标准曲线计算HER2待测溶液浓度；所述HER2适配体碱基序列为：GCAGCGGTGTGGGGTATCGTTAATTCGGTCG；所述两条互补单链DNA的碱基序列分别为：ATAGCAATTAAGCCAGCCAGGTTCGGTGCAT和GCTGGCT TAATTGCTATATGCACCGAACCTG。

2.根据权利要求1所述的基于DNA产生电信号及其自组装放大信号的电化学适配体传感器测定HER2的方法，其特征在于：金电极表面活化处理的过程为：将金电极依次采用氢氧化钠溶液和Piranha溶液活化处理。

3.根据权利要求2所述的基于DNA产生电信号及其自组装放大信号的电化学适配体传感器测定HER2的方法，其特征在于：金电极采用氢氧化钠溶液活化处理过程为：将金电极置于0.08～0.12M的NaOH溶液中，通过循环伏安法，在-1.5～0.6V的电压区间内扫循环伏安曲线20～40圈，扫描速率为0.5～1.5V/s，得到平滑稳定的扫描曲线；

金电极采用Piranha溶液活化处理过程为：将金电极置于Piranha溶液中，浸泡5～10分钟。

4.根据权利要求1所述的基于DNA产生电信号及其自组装放大信号的电化学适配体传感器测定HER2的方法，其特征在于：在4～25℃温度下，将金电极在HER2特异性多肽溶液中浸泡8～12h，用水清洗金电极后，再将金电极置于巯基己醇溶液中浸泡1～1.5小时。

5.根据权利要求1所述的基于DNA产生电信号及其自组装放大信号的电化学适配体传感器测定HER2的方法，其特征在于：将HER2标准溶液滴加到金电极表面，在4～25℃条件下反应1～2个小时；再将HER2适配体溶液滴加到金电极表面，在4～25℃条件下反应1～2个小时；再将含两条互补单链DNA的溶液滴加到金电极表面，在35～39℃条件下反应3～4个小时；再将Na₂MoO₄溶液滴加到金电极表面，反应10～20分钟。

6.根据权利要求1所述的基于DNA产生电信号及其自组装放大信号的电化学适配体传感器测定HER2的方法，其特征在于：方波伏安法是在H₂SO₄溶液中，在0.1～0.45V的电势范围内进行方波伏安曲线的测定。

7.根据权利要求1所述的基于DNA产生电信号及其自组装放大信号的电化学适配体传感器测定HER2的方法，其特征在于：一系列不同浓度的HER2标准溶液为浓度分别为0pg/mL、1pg/mL、5pg/mL、10pg/mL、25pg/mL、50pg/mL、100pg/mL和200pg/mLHER2标准溶液。