[发明专利]靶向NY-ESO-1的T细胞受体及其用途

说明书

本发明公开了一种靶向NY‑ESO‑1的T细胞受体及其用途。由NY‑ESO‑1 TCRα链、P2A、NY‑ESO‑1 TCRβ链串联构成。该T细胞受体用于修饰人的T淋巴细胞，修饰后的T细胞(TCR‑T细胞)能用于表达HLA‑A2+NY‑ESO‑1阳性肿瘤的治疗。本发明制备的NY‑ESO‑1 TCR‑T细胞对特异性肿瘤细胞(U266、T2‑NY‑ESO‑1)都具强烈的功能，CD107a表达和IFNγ分泌较高，效靶比是5:1的情况下对U266杀伤效率达到80％。

技术领域

本发明属于T细胞受体领域，具体涉及靶向NY-ESO-1的T细胞受体及其用途。

背景技术

近年来人们在筛选肿瘤特异性抗原方面取得了很大进展，发现了大量肿瘤相关抗原和肿瘤特异性抗原。1991年比利时的Boon教授和他的同事们首先发现的肿瘤睾丸(cancer-testis antigen，CT)抗原，CT是目前鉴定出来的肿瘤特异性抗原中数目最多的一类，它们具有以下共同特征：一般在正常组织中不表达；在肝癌、恶性黑色素瘤、肺癌等多种肿瘤中有不同强度的表达；编码基因位于X染色体上。由于上述特点，CT抗原被认为是肿瘤特异性的共享抗原。

CT抗原包括黑色素瘤抗原(MAGE)家族、SSX基因家族、LAGE、GAGE、CTp11和NY-ESO-l等，NY-ESO-1是由Chen Y.T.等使用重组cDNA文库血清学分析技术从食管癌cDNA表达文库中筛出来的一种肿瘤共享抗原。NY-ESO-1基因家族至少拥有3个成员，他们分别是NY-ESO-1、LAGE-1和ESO3，基因均定位于Xq28。NY-ESO-1基因转录的mRNA最长747bp，表达的蛋白质相对分子质量为18KD，由180个氨基酸组成，其C端存在一疏水性氨基酸尾，在NY-ESO-1蛋白上有潜在的跨膜区域。采用RT-PCR和免疫组织化学法检测NY-ESO-l mRNA及其蛋白的表达情况，研究者对NY-ESO-1在各个系统的肿瘤的表达进行了研究，结果表明NY-ESO-1在各肿瘤表达频率不一，在神经母细胞瘤、滑膜肉瘤、恶性黑素瘤、卵巢癌等肿瘤组织中表达较高，在结直肠癌、肝癌、尿路上皮癌、多发性骨髓瘤、肺癌中也有不同程度的表达，但在一些类型的肿瘤如直肠癌、肾癌、白血病及淋巴瘤组织中NY-ESO-1的表达较低，甚至不表达。NY-ESO-1在正常组织中也有表达，主要表达于睾丸和卵巢，低表达于子宫，但是由于血睾屏障的存在，正常组织遭受的免疫毒性能得到有效控制。NY-ESO-l的表达特征，展现了良好的临床应用前景，成为了国内外学者的研究重点。近年来，NY-ESO-l是过继性免疫治疗的重要靶点。

由于难以从大多数肿瘤患者体内获得对肿瘤抗原有高亲和力和特异性的肿瘤反应性T细胞。研究者逐渐尝试通过基因工程的方法，将可识别肿瘤抗原的特异性TCR基因导入患者T细胞，从而获得特异性TCR基因转染T细胞。即通过对患者无能T细胞抗原特异性的再定向(redirect)，获得肿瘤反应性T细胞。从根本上说，TCR是T细胞识别抗原的分子基础。就占外周血T淋巴细胞总数的80％以上的α⁺β⁺T细胞而言。其TCR分子由α、β双链构成，TCRα链和β链都在蛋白结构上均由可变区(V区)和恒定区(C区)两部分组成，其中V区是识别抗原肽/MHC复合物(pMHC)的关键部位。TCRα链和β链的V区各含有三个与免疫球蛋白的V区结构类似的高变区，也称互补决定区(Complementarity Determining Region，CDR)，一般用CDRl、CDR2和CDR3表示。另外，TCRVβ链还含有第四个高变区CDR4。通过基因重排等机制形成的具有极高多样性的TCR决定了T细胞识别抗原的多样性，使成熟T细胞表达的TCRαβ双链组成了一个能与成千万种抗原(理论上可达到10¹⁴级)结合的抗原识别受体库(repertoire)