[发明专利]基于再生液优化的表面等离子共振技术同时检测食品中多种农兽药残留的方法

说明书

技术领域

本发明涉及食品安全检测领域，特别是涉及一种基于再生液优化的表面等离子共振技术同时检测食品中多种农兽药残留的方法。

背景技术

随着生活水平的提高，人们对食品的质量与安全状况更为关心。然而，目前食品安全问题时有发生，特别是在食品中农兽药残留方面，依然十分普遍，这也成为了食品安全最大的风险。面对农兽药残留的严峻形势，合理高效地分析检测是保障食品安全、控制农兽药残留的重要环节。

其中，基于表面等离子共振技术(Surface Plasmon Resonance，SPR)开发的生物传感器具有无需标记、高灵敏、快速检测等特点，是食品安全检测的理想工具之一。但是，在低分子量物质的检测方面，SPR仍存在信噪比大、响应值小、灵敏度低等不足，而食品中农兽药残留大部分分子量较低，如西维因，链霉素等。此外，食品中残留的农兽药不止一种，使得传统的检测过程复杂繁琐，单检测通道的SPR传感器无法满足同时检测多种农兽药残留组分的要求。因此，迫切需要开发基于SPR技术的新型检测方法，实现食品中多种农兽药残留的高灵敏、快速、同时检测。

发明内容

为解决现有技术中存在的问题，本发明提供一种基于再生液优化的表面等离子共振技术，能够快速高效的同时检测食品中多种农兽药残留的方法。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种基于再生液优化的表面等离子共振技术同时检测食品中多种农兽药残留的方法，包括下述步骤：

(1)传感芯片表面包被原或抗体的固定：将各农兽药残留组分的包被原或抗体混合至混合液的体积为50-150μL，所述各包被原或抗体在所述混合液中的浓度均为5-20μg/mL，再利用活化酯法(EDC/NHS)将所述混合液固定在所述传感芯片表面；

(2)标准溶液配制：用0.01-0.1mol/L、pH范围为6-8的羟乙基哌嗪乙硫磺酸盐缓冲液(HBS缓冲液)配置各农兽药残留组分的标准样品储备液，所述标准样品储备液的浓度均为0.1-1mg/mL；

量取所述标准样品储备液，配制其相应的标准原液；用HBS缓冲液将所述标准原液配制成不同浓度的标准溶液，取不同浓度待测残留组分的标准溶液与过量的固定浓度的相应抗体或包被原混合孵化，得到不同浓度的待测物混合液；

(3)测试再生液洗脱能力：测试HCl溶液、NaOH溶液、氯化镁溶液以及甘氨酸-盐酸溶液对于步骤(1)得到的传感芯片表面各残留组分抗体的洗脱情况；

(4)建立标准工作曲线：

单组分的检测：通入50-100μL步骤(2)制备的不同浓度的所述待测物混合液，记录表面等离子体共振传感器的响应信号变化，绘制标准工作曲线，并进行多项式曲线拟合，获得单组分回归曲线的方程；再依次测得其它残留组分的标准工作曲线及单组分回归曲线的方程；

多组分检测：将多种步骤(2)制备的标准溶液与过量的抗体或包被原混合孵化，取孵化后的混合液50-100μL，进样，记录下总体的响应信号变化，然后按照步骤(3)的测试结果，依再生液洗脱能力由弱到强的顺序依次进样洗脱，记录响应值变化；根据不同浓度孵化后的混合液及其相应再生后残留抗体或包被原的响应值绘制标准工作曲线并拟合，获得多组分回归曲线的方程；

(5)定量检测：对于未知含量的含多种残留组分的未知样品进行同时检测，向所述未知样品的待测液中分别加入过量的抗体或包被原，混合孵化后进样，记录总体的响应值变化；按照再生液洗脱能力由弱到强的顺序依次进样洗脱，记录芯片表面每次残留抗体或包被原的响应值变化；将残留抗体或包被原的响应值代入步骤(4)得到的多组分检测的标准工作曲线以及相应的单组分检测标准工作曲线，计算各残留组分的浓度值；

(6)通入0.01-0.02mol/L、pH值为1.2-2.5的甘氨酸-盐酸缓冲溶液使芯片再生，再生后的芯片用于后续检测。

优选的是，步骤(2)中，所述的pH值为7.4。

优选的是，步骤(5)中，标准样品储备液与过量抗体或包被原的混合孵化时间为5-10分钟。

在上述方法的步骤(1)中，当传感芯片表面固定的是包被原的混合液时，在后续步骤中进行混合孵化时就采用抗体。反之，在上述方法的步骤(1)中，当传感芯片表面固定的是抗体的混合液时，在后续步骤中进行混合孵化时就采用包被原。