[发明专利]基于再生液优化的表面等离子共振技术同时检测多种环境激素的方法

说明书

技术领域

本发明属于检测方法领域，特别是涉及一种基于再生液优化的表面等离子共振技术同时检测多种环境激素的方法。

背景技术

近些年来，环境激素作为一种生物机体以外的激素类物质，已经被广泛的应用于人们的日常生活中。虽然环境激素给人们带来了一定的经济效益，但是其在环境和食品中的残留严重的影响着人类身体健康。而且，多数环境激素属于持久性有机污染物，很难降解，并具有一定的蓄积毒性，因此，对于环境激素的监控与分析势在必行。

目前，环境激素大多是通过高效液相色谱、液相色谱-质谱联用以及酶联免疫法(ELISA)等方法进行检测分析，但是由于仪器操作技术性强、耗时长、样品前处理繁琐、基质成分复杂、ELISA中样品用量浪费以及不能重复使用等缺陷，限制了这些传统方法的应用。因此，需要开发一种更加可靠、高效、灵敏的检测手段。

表面等离子共振生物传感器(Surface Plasmon Resonance，SPR)，具有无需标记、高灵敏、快速检测等特点，是环境激素检测的理想工具之一。结合免疫检测技术，利用抗体与抗原的结合的原理，对特定的目标物分子进行定性或者定量分析，而且抗体等蛋白类物质具有较大的分子量，能够引起较高的SPR响应值变化，可以广泛应用于小分子物质(如双酚A、塑化剂等)的环境激素检测。此外，由于环境激素种类繁多，使得传统的检测过程复杂繁琐，单检测通道的SPR传感器无法满足同时检测多种环境激素的要求。因此，迫切需要开发基于SPR技术的新型检测方法。

发明内容

针对现有技术中存在的不足，本发明提供一种基于再生液优化的表面等离子共振技术同时检测多种环境激素的方法。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种基于再生液优化的表面等离子共振技术同时检测多种环境激素的方法，包括以下步骤：

(1)传感芯片表面包被原或抗体的固定：将各环境激素残留组分的包被原或抗体混合至混合液的体积为50-150μL，所述各包被原或抗体在所述混合液中的浓度均为5-20μg/mL，再利用活化酯法(EDC/NHS)将所述混合液固定在所述传感芯片表面固定；

(2)标准溶液配制：用0.01-0.1mol/LpH为6-8的羟乙基哌嗪乙硫磺酸盐缓冲液(HBS缓冲液)配置各残留组分的标准样品储备液，所述标准样品储备液的浓度均为0.1-1mg/mL；

量取各标准样品储备液，配制其相应的标准原液；用羟乙基哌嗪乙硫磺酸盐缓冲液将标准原液配制成不同浓度的标准溶液与过量的固定浓度的相应抗体或包被原混合孵化，得到不同浓度的待测物混合液；

(3)测试再生液洗脱能力：测试HCl溶液、NaOH溶液、氯化镁溶液和甘氨酸-盐酸溶液对于步骤(1)得到的传感芯片表面各环境激素抗体的洗脱情况，选出各组分的最佳再生条件，并对比其再生液洗脱能力的强弱；

(4)建立标准工作曲线：

单组分检测：采用表面等离子共振谱传感器测量，通入50-100μL步骤(2)得到的混合液，记录表面等离子体共振传感器的响应信号变化，绘制标准工作曲线，并进行多项式曲线拟合，获得单组分回归曲线的方程；再依次测得其它环境激素的标准工作曲线及单组分回归曲线的方程；

多组分同时检测：采用表面等离子共振谱传感器测量，将多种步骤(2)制备的标准溶液与过量的抗体或包被原混合孵化，取孵化后的混合液50-100μL，通入传感器，记录下表面等离子体共振传感器总体的响应信号变化；然后按照步骤(3)的的测试结果，依再生液洗脱能力由弱到强的顺序依次进样洗脱，记录每次残留抗体或包被原的响应值变化；根据不同浓度孵化后的混合液及其相应再生后残留抗体或包被原的响应信号值绘制标准工作曲线，并进行多项式曲线拟合，获得多组分回归曲线方程；

(5)定量检测：对于未知含量的含多种环境激素的未知样品进行同时检测，向所述未知样品的待测液中分别加入过量的抗体或包被原，混合孵化后进样，记录总体的响应值变化；按照再生液洗脱能力由弱到强的顺序依次进样洗脱，记录芯片表面每次残留抗体或包被原的响应值变化；将残留抗体或包被原的响应值代入步骤(4)得到的多组分检测的标准工作曲线以及相应的单组分检测标准工作曲线，计算各环境激素的浓度值；依次类推，实现对于环境激素的定量检测；

(6)通入0.01-0.02mol/L、pH为1.2-2.5的甘氨酸-盐酸缓冲溶液使芯片再生，再生后的芯片用于下次测量。

优选的是，步骤(2)中，所述的pH值为7.4。