[发明专利]一种岩生忍冬成分鉴定及抗菌活性评价方法

说明书

技术领域

本发明属于岩生忍冬成分鉴定技术领域，尤其涉及一种岩生忍冬成分鉴定及抗菌活性评价方法。

背景技术

岩生忍冬(Lonicera rupicola Hook.f.et Thomson)，又名西藏忍冬，为忍冬科忍冬属植物，产于宁夏南部、甘肃临潭、青海东南部、四川西部、云南西北部及西藏东部至西南部，长于海拔3.6km以上的高山或山坡灌木丛中。在中国，忍冬属资源也较为丰富，尤以西南部种类最多。忍冬属内有不少药用植物和具有观赏价值的绿化植物，据初步统计，属内可药用植物有49种，对许多致病菌有较强的抗菌作用。据现有资料表明，忍冬属植物中的化学成分主要有四类：黄酮类、挥发油类、绿原酸类、苷类，此外还有甾醇类、糖类、无机元素类等。近年来，随着合成及半合成抗菌素的增多和广泛使用，临床上细菌耐药性问题日趋严重，面对这一严峻现状，发挥中药的治疗优势将成为重要课题。随着抗菌素种类增多和广泛使用，细菌耐药性问题日趋严重，药物的不良反应也不断增加。由于化学合成药物开发难度大，毒副作用明显。学者们都在各种中草药成分的抗菌活性方面展开了研究工作，期望从中草药中得到更加理想的抗菌药物。目前为止，忍冬属植物中除金银花、山银花等在医药、食品等方面广为应用而其药理毒理作用得到深入研究外，其他忍冬属的药理毒理作用很少有研究报道。相关报道金银花醇浸液对金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、溶血性链球菌、肺炎杆菌、脑膜炎双球菌、伤寒杆菌、副伤寒杆菌、大肠杆菌、痢疾杆菌、变形杆菌、百日咳杆菌、绿脓杆菌、结核杆菌、霍乱杆菌等多种革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌均有一定的抑制作用。山银花对白喉杆菌也有很强的抗菌作用，高剂量的山银花能明显减少金黄色葡萄球菌感染小鼠所致死亡率。目前，由于岩生忍冬生长条件的特殊性及其资源分布等因素，对岩生忍冬作为药用植物研究尤其是对其活性成分和抗菌活性无明确报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种岩生忍冬成分鉴定及抗菌活性评价方法，旨在解决目前由于岩生忍冬生长条件的特殊性及其资源分布等因素，对岩生忍冬作为药用植物研究尤其是对其活性成分和抗菌活性无明确报道的问题。

本发明是这样实现的，一种岩生忍冬成分鉴定方法，所述岩生忍冬成分鉴定方法采用理化反应和薄层层析法鉴定岩生忍冬的化学成分，用纸片法和微量肉汤稀释法检测岩生忍冬石油醚、乙酸乙酯、甲醇和水提取物的体外抑菌活性；

所述理化反应具体包括：称取10g岩生忍冬粉末，浸泡于100mL蒸馏水中，密封浸泡24h，过滤，取其滤液；取若干灭菌试管，在试管中加入一定量岩生忍冬滤液，再分别加入各类一定量检测试剂，观察并记录结果；

所述薄层层析法具体包括：取层析缸，以石油醚：乙酸乙酯＝1:10，v/v，为展开剂，在硅胶板上点样后放入层析缸中，展开后在紫外灯365nm下观察记录有无荧光及荧光颜色，喷上显色剂后再在紫外灯365nm下观察荧光情况并记录。

进一步，所述理化反应中试剂配制包括：

有机酸类显色剂：

甲基红试剂：称取甲基红100mg溶于100mL乙醇中即可；

溴甲酚绿指示剂：称取溴甲酚绿0.04g溶于100mL乙醇中，用0.1mol/mL氢氧化钠溶液调至蓝色刚刚出现，移入棕色瓶中保存；

吖啶试剂：称取吖啶5mg溶于100mL乙醇中即可；

酚和鞣质类显色剂：

氯化钠明胶试剂：称取明胶1g溶于50mL水中，然后加10g氯化钠使溶解，加水稀释到100mL；

三氯化铁试剂：5％三氯化铁乙醇溶液加入少许盐酸；

三萜、甾体类显色剂：20％磷钼酸乙醇试剂；

黄酮类显色剂：2％醋酸镁甲醇试剂；

苯丙素类显色剂：5％氢氧化钠甲醇溶液试剂；

醌类显色剂：

无色亚甲基蓝试剂：准确称取100mg亚甲基蓝溶于100mL乙醇中，加入1mL冰醋酸、1g锌粉，搅拌至蓝色消失，移入棕色瓶中，避光保存；

强心苷类显色剂：

3，5-二硝基苯甲酸试剂：称取3，5-二硝基苯甲酸1g，用50mL甲醇溶解，加入1mol/L氢氧化钠溶液50mL，混合即可；

三氯乙酸试剂：称取25g三氯乙酸溶于100mL乙醇中即可；

生物碱类显色剂：

改良碘化铋钾试剂：称取次硝酸铋0.85g加入10mL冰醋酸和40mL水混合得溶液1；称取碘化钾8g加入20mL水溶液得溶液2；取溶液1和溶液2混合，取混合液1mL，加入2mL冰醋酸和10mL水混合即得试剂，移入棕色瓶中保存；