[发明专利]耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的检测方法及试剂盒

说明书

本发明涉及耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的检测方法及试剂盒。本发明揭示了一种可特异性鉴定MRSA的试剂及试剂盒，其具有灵敏度高、特异性好、操作简单与快速明了的特点。

技术领域

本发明属于微生物学领域，更具体地，本发明涉及临床样本中食源性致病菌——耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的检测鉴定方法及检测试剂盒。

背景技术

金黄色葡萄球菌是临床上常见的毒性较强的细菌，在青霉素被广泛使用后，有些金黄色葡萄球菌产生青霉素酶，能水解β-内酰胺环，表现为对青霉素的耐药。科学家研究出一种新的能耐青霉素酶的半合成青霉素，即甲氧西林(methicillin)，应用于临床后曾有效地控制了金黄色葡萄球菌产酶株的感染，可后续又发现耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-Resistant Staphylococoecus Aureus，MRSA)，MRSA从发现至今感染几乎遍及全球，已成为院内和社区感染的重要病原菌之一。

MRSA感染的治疗是临床十分棘手的难题之一，关键是其对许多抗生素有多重耐药。因其耐药机制是PBPs(青霉素结合蛋白)性质的改变，因此，MRSA几乎对所有的β-内酰胺类抗生素耐药，且在同时，还可能对大环内酯类抗生素、氨基糖苷类抗生素等多种抗菌药物表现出耐药性。

目前，金黄色葡萄球菌的检测金标准是通过细菌的分离，增菌、分离培养、生化鉴定等一系列步骤来完成，灵敏度低，操作较繁琐，耗费时间长。目前对于革兰氏阳性细菌瓶的检测方法为菌落的培养，当菌落培养以后还需要18-48小时的时间确定该培养瓶中的菌。目前美国Cepheid公司研发的Xpert MRSA检测试剂盒，应用比较广泛，其采用的是定量PCR的方法，但是其灵敏度还有待提高。

因此，本领域还需要研究优化的MRSA检测试剂，来更为高效地检测出MRSA。

发明内容

本发明的目的在于提供一种耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的检测方法，以及检测试剂盒。本发明的方法特异性更强，检测时间更短，因此更适合临床使用，为MRSA感染诊断及其污染的快速检测提供依据，可用于临床感染诊断及食品卫生监管、商品检验检疫等。

在本发明的第一方面，提供一种鉴定耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的方法，所述方法包括：以待测样品的DNA为模板，以SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示的引物以及SEQ IDNO:3所示的探针进行PCR检测。

在一个优选例中，所述的待测样品包括：体液、痰液、尿液、血液、唾液、食品、饲料、水产品或遗传物质材料。

在另一个优选例中，所述方法的检测限是5.0×10³拷贝/ml。

在另一个优选例中，所述的PCR检测是实时荧光PCR检测。

在另一个优选例中，所述的方法为非诊断目的的方法。

在本发明的另一方面，提供一种鉴定耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的试剂盒，其中包括SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示的引物，以及SEQ ID NO:3所示的探针。

在一个优选例中，所述试剂盒中，所述的探针带有荧光信号。

在另一个优选例中，所述的探针是Taqman探针。

在另一个优选例中，所述试剂盒中还包括选自以下的一种或多种试剂：阴性质控品、阳性质控品、弱阳性质控品、阳性定量参比品。

在另一个优选例中，所述试剂盒中还包括选自以下的一种或多种：DNA提取试剂，Taq酶，PCR缓冲液，DNA聚合酶，裂解液，蛋白酶K，说明鉴定耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的方法的使用说明书。

在本发明的另一方面，提供前面任一所述的试剂盒的用途，用于从待测样品中鉴定耐甲氧西林金黄色葡萄球菌。