[发明专利]生物组织器官透明化处理液、处理方法和免疫标记方法

说明书

本发明涉及生物组织器官透明化处理液、处理方法和免疫标记方法。本发明的生物组织器官透明化处理液包含：尿素；非离子表面活性剂，其为曲拉通和吐温的混合物；水；和以下任选组分中的至少一种：糖类、氨类、pH调节剂和抗氧化剂。该处理液可使完整脑、脏器、荷瘤脏器等整体器官透明，并且允许抗体等生物大分子进入整体器官内。本发明的方法简单、高效、荧光兼容、允许免疫标记，对于在整体器官尺度上探索生物组织三维结构、简化病理组织检验方法等，具有重要的应用价值。

技术领域

本发明涉及生物组织器官透明化和免疫标记的方法，特别是涉及一种让完整脑、脏器(例如肝、肾脏、心脏)、荷瘤脏器等整体器官透明化的处理液及处理方法以及免疫荧光标记方法。

背景技术

组织透明方法可以实现组织无损情况下的大尺度高分辨检测与组织形态的三维结构重建。相对于传统的组织切片与染色方法具有显著性的进步。目前开发的所有组织透明方法，其机理的假设是基于两个方面：1)生物膜脂质对光线的散射作用；2)生物组织内部各组成成分折光率的差异。目前，组织透明方法一般采用清除细胞膜脂质，以及选择高折射率溶液的折射率匹配，从而实现生物组织的透明化。现存的透明方案有：有机溶液浸泡实现溶液和样本组织折射率的匹配，如BABB，iDisco等；水溶液浸泡实现溶液和样本组织折射率的匹配，如SeeDB，Fruit等；丙烯酰胺包埋成凝胶，然后电泳去除脂质或者溶液浸泡匹配组织折光率，如Clarity，Act-presto等。其中，部分组织透明方案允许整体器官免疫标记，如iDisco、Clarity、Cubic、ACT-presto等，Clarity和Cubic均去除了细胞膜，允许大分子进入，但是过程繁琐，需时近1-2周；iDisco是有机溶剂，荧光兼容性较差，组织变硬变脆，且刺激性气味对人体有害；ACT-presto借助压力，需要专门设备，且免疫标记前需要繁杂的前处理过程。

发明内容

本发明旨在提供一种操作简单、高效、无明显结构变形的整体器官透明及免疫标记的技术方案。

为了实现上述目的，作为本发明的一个方面，本发明提供一种生物组织器官透明化处理液，包含：

尿素；

非离子表面活性剂，其为曲拉通和吐温的混合物；

水；和

以下任选组分中的至少一种：糖类、氨类、pH调节剂和抗氧化剂。

在某些实施方案中，曲拉通包括曲拉通X-100和曲拉通X-114。

在某些实施方案中，吐温包括吐温20，吐温40和吐温60。

在某些实施方案中，非离子表面活性剂中曲拉通与吐温的体积比例为5:3至1:5；优选地曲拉通为曲拉通X-100并且吐温为吐温60。

在某些实施方案中，糖类为果糖或蔗糖中的至少一种。

在某些实施方案中，氨类为氨水。

在某些实施方案中，pH调节剂为碳酸钠/碳酸氢钠、醋酸钠和柠檬酸钠中的至少一种。

在某些实施方案中，抗氧化剂为巯基乙醇、α-巯基甘油、硫辛酸和维生素C中的至少一种。

在某些实施方案中，每100ml处理液包含：20-30g的尿素，5-30ml的非离子表面活性剂，0-60g的糖类，0-20ml的氨类，0-200mmol/l的pH调节剂，0-2ml的抗氧化剂，余量为水。

在某些实施方案中，每100ml处理液包含：20-30g的尿素，10-15ml的非离子表面活性剂，40-60g的糖类，0-20ml的氨类，0-2ml的抗氧化剂，余量为水；优选地，随着糖类含量的增加，尿素含量也增加，或者随着糖类含量的减少，尿素含量也减少。