[发明专利]一种以多肽修饰的氨基树脂为载体的固定化酶及制备方法

权利要求书

1.一种以多肽修饰的氨基树脂为载体的固定化酶，包括脂肪酶和脂肪酶固定化所需载体，其特征在于，

所述载体为多肽修饰的氨基树脂；

所述的多肽为氨基酸序列为10个亮氨酸残基组成的多肽片段；或10个苯丙氨酸残基组成的多肽片段；

残基羧基端的羧基与氨基树脂上的氨基形成肽键偶合。

2.一种以多肽修饰的氨基树脂为载体的固定化酶的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)树脂载体的制备；

采用芴甲氧羰基多肽固相合成法，将芴甲氧羰基保护的氨基酸与氨基树脂上的氨基形成肽键偶联到氨基树脂上，并根据设计需求延长氨基酸链长度，得到经多肽修饰的氨基树脂载体；步骤如下：

①将氨基树脂溶胀；

②按照氨基酸序列中的从羧基端到氨基端的顺序，依次将芴甲氧羰基保护的氨基酸偶联到树脂上；

其中，所述的芴甲氧羰基保护的氨基酸为芴甲氧羰基-L-亮氨酸或芴甲氧羰基-L-苯丙氨酸，两种氨基酸的氨基酸链长度均为10；

偶联过程中，使用的缩合试剂为1-羟基苯并三唑和N,N'-二异丙基碳酰亚胺的组合物；氨基树脂位点数、氨基酸、1-羟基苯并三唑和N,N'-二异丙基碳酰亚胺的物质的量的比为1：3：3：3；

③使用含20％v/v哌啶的N,N-二甲基甲酰胺溶液，反应10min×4，脱去末端氨基酸上的芴甲氧羰基；之后用N,N-二甲基甲酰胺将树脂洗涤数遍，抽滤掉滤液，分别用甲醇和二氯甲烷交替洗涤，保证最后一遍使用甲醇进行洗涤，抽干既得所需的载体

2)固定化酶的制备：将多肽修饰的氨基树脂载体加入脂肪酶溶液中，30℃振荡反应6h，通过砂芯管将酶液滤出，用缓冲液淋洗，抽干后获取所述固定化酶；

其中脂肪酶溶液浓度为4mg/mL，溶剂为0.02M pH7.0的磷酸盐和0.2M的氯化钠缓冲液；对于每克干重的载体，脂肪酶溶液的用量为50mL。