[发明专利]一种嗜热真菌角质酶及其编码基因与应用

权利要求书

1.一种蛋白质，是如下1)或2)所述的蛋白质：

1)序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

2)序列表中序列2自氨基末端第17至215位所示的氨基酸序列组成的蛋白质。

2.编码权利要求1所述蛋白质的核酸分子。

3.如权利要求2所述的核酸分子，其特征在于：所述核酸分子为DNA分子或RNA分子；所述DNA为cDNA、基因组DNA或重组DNA；所述RNA为mRNA或hnRNA。

4.如权利要求3所述的核酸分子，其特征在于：所述DNA分子为如下1)所述的DNA分子：

1)序列表中序列1所示的核苷酸序列组成的DNA分子。

5.含有权利要求2或3或4所述核酸分子的表达盒。

6.含有权利要求2或3或4所述核酸分子的重组载体。

7.如权利要求6所述的重组载体，其特征在于：所述重组载体是在pPIC9K的多克隆位点插入序列表中序列1所示的核苷酸序列得到的重组质粒pPIC9K-McCut。

8.含有权利要求2或3或4所述核酸分子的重组菌。

9.如权利要求8所述的重组菌，其特征在于：所述重组菌通过将所述重组载体导入宿主微生物中得到。

10.权利要求1所述蛋白质的生产方法，其特征在于：所述方法是将权利要求8所述重组菌进行发酵培养，得到所述的蛋白质。

11.如权利要求10所述的蛋白质的生产方法，其特征在于：所述发酵培养依次经过如下步骤：

1)种子液培养：将重组菌接种到150mL BMGY培养基中，在30℃，200rpm条件下振荡过夜培养至OD₆₀₀为2-6，得到种子液；

2)基础培养：将步骤1)的种子液接种于含有1.5L基本培养基BSM的5L发酵罐中培养，所述培养温度为30℃，pH为4.0，转速600rpm，待甘油消耗完全，进行甘油流加培养；

3)甘油流加培养：流加质量浓度为50％的甘油，温度为30℃，pH为5.0，通过调整流加速度保持溶氧在20％-70％，流加时间4-6h；待菌体湿重达到180-220g/L，停止流加甘油；

4)甲醇诱导培养：停止流加甘油后，饥饿半小时，流加100％甲醇诱导，转速800rpm，培养温度为30℃，pH为6.0，溶氧20％-70％。

12.权利要求1所述蛋白质在水解黄油制备奶味香精和合成风味酯中的应用。