[发明专利]一种鉴别刺槐种质资源亲缘关系的SSR标记引物组及其应用

权利要求书

1.一种鉴别刺槐种质资源亲缘关系的SSR标记引物组，SSR标记引物组共四组，每组包括4对引物；第一组的四对SSR标记引物分别为，标记Rops04的上游引物核苷酸序列如SEQID NO.1所示，下游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；标记RP106的上游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，下游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；标记Rops09的上游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示，下游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示；标记RP150的上游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示，下游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示；

第二组的四对SSR标记引物分别为，标记RP035的上游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示，下游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示；标记RP109的上游引物核苷酸序列如SEQID NO.11所示，下游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.12所示；标记RP200的上游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.13所示，下游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.14所示；标记RP032的上游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.15所示，下游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.16所示；

第三组的四对SSR标记引物分别为，标记Rops02的上游引物核苷酸序列如SEQ IDNO.17所示，下游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.18所示；标记Rops06的上游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.19所示，下游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.20所示；标记Rops08的上游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.21所示，下游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.22所示；标记RP206的上游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.23所示，下游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.24所示；

第四组的四对SSR标记引物分别为，标记Rops05的上游引物核苷酸序列如SEQ IDNO.25所示，下游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.26所示；标记Rops10的上游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.27所示，下游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.28所示；标记RP165的上游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.29所示，下游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.30所示；标记RP01B的上游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.31所示，下游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.32所示。

2.如权利要求1所述的SSR标记引物组，其特征在于，所述标记Rops04的上游引物、标记RP150的上游引物、标记RP200的上游引物、标记RP032的上游引物、标记Rops06的上游引物、标记RP206的上游引物、标记Rops05的上游引物、标记Rops10的上游引物的5’端连接有荧光标签FAM；

所述标记RP106的上游引物、标记RP109的上游引物、标记Rops08的上游引物、标记RP01B的上游引物的上游引物的5’端连接有荧光标签HEX；

所述标记Rops09的上游引物、标记RP035的上游引物、标记Rops02的上游引物、标记RP165的上游引物的5’端连接有荧光标签TAM。

3.一种利用权利要求1或2所述SSR标记引物组鉴别刺槐种质资源亲缘关系的方法，包括如下步骤：

（1）取待鉴别样品，提取总DNA；

（2）以步骤（1）制得的总DNA为模板，分别用上述鉴别刺槐种质资源亲缘关系的四组SSR标记引物进行PCR扩增，制得PCR扩增产物；

（3）对步骤（2）制得的PCR扩增产物进行分析，当扩增出SSR标记时，用1表示，当未扩增出SSR标记时，用0表示，将每对SSR标记扩增后的结果转换为矩阵，用非加权算术平均聚类方法（UPGMA）分析计算遗传距离，得出刺槐种质资源亲缘关系。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述步骤（1）中，样品为叶片或枝条。

5.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述步骤（1）中，总DNA的提取方法采用改良的CTAB 法。