[发明专利]一种血小板及含有血小板的制剂的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及血液成分分离领域，具体而言，涉及一种血小板及含有血小板的制剂的制备方法。

背景技术

血小板，是哺乳动物中的有形成分之一，是从骨髓成熟的巨核细胞胞质裂解脱落下来的具有生物活性的小块胞质。血小板的体积小，无细胞核，呈双面微凹的圆盘状，直径为2-3微米。血小板具有特定的形态结构和生化组成，其在止血、伤口愈合、炎症反应、血栓形成及器官移植排斥等生理和病理过程中有重要作用。

现有的血小板制备方法主要有：洗涤法、梯度密度离心法、凝胶过滤法、免疫磁珠分选技术、以及流式细胞术。这些方法都各有优劣，比如洗涤法和梯度密度离心法，适用于少量血液中血小板的分离纯化，但血小板的纯度和回收率都会相对偏低；凝胶过滤法也是适用于少量血液中血小板的分离纯化，虽然其能提高血小板的纯度，但其操作复杂、分离难度大；同时，免疫磁珠分选技术，虽然该方法得到的血小板的回收率和纯度均较高，但该方法所用的磁珠以及抗体的价格高昂，导致分离纯化的成本高；而采用流式细胞仪，一次上机全血至少是400mL，不适用少量全血中血小板的分离，且费用昂贵、整个分离流程所需时间较长。因此，目前急需一种成本低廉且能够大幅提高血小板的纯度及回收率的血小板的制备方法。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种血小板的制备方法，这种制备方法能够有效的去除血小板中混有的白细胞，且能够有效避免血小板的损失，从而提高所制得的血小板的纯度和回收率。

本发明的第二目的在于提供一种含有血小板的制剂的制备方法，由这种制备方法制得的制剂中，血小板的纯度高，且其中不含白细胞，使用安全性高。

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

一种血小板的制备方法，其包括：

将抗凝全血样品进行第一次离心得到上层液；再对上层液进行过滤处理以去除上层液中的白细胞，得到滤液；随后对滤液进行第二次离心，保留沉淀。

一种含有血小板的制剂的制备方法，该血小板是通过上述方法制备得到。

与现有技术相比，本发明的有益效果为：

本发明提供的血小板的制备方法，适用于较少量的全血中(低至1ml)的血小板的分离，通过这种方法能够有效的去除血小板中混有的白细胞，且能够有效避免血小板的损失，从而提高所制得的血小板的纯度和回收率，在本发明中，通过这种方法所得到的血小板的纯度高达95％以上，且血小板的回收率高达80％以上。此外，这种方法的工艺步骤简单，所使用的试剂及设备均容易得到且价格低廉，因此其制备高纯度的血小板的成本低、周期短。

具体实施方式

下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

目前，从全血中分离血小板的技术主要有：洗涤法、梯度密度离心法、凝胶过滤法、流式细胞仪、以及免疫磁珠分选技术。但是对于如何在较低成本下从较少量的全血中分离得到高纯度(至少大于90％)的血小板，上述技术均无法实现。这主要是因为：流式细胞仪对上机血量有要求(至少大于400mL)，因此不适用于少量全血的分离；免疫磁珠分选技术虽然能够得到高纯度及高回收率的血小板，然而磁珠及抗体的价格高昂，导致分离纯化的成本偏高，不实用；而洗涤法、梯度密度离心法、凝胶过滤，这3种方法是根据血小板的物理属性进行分离，不能有效去除白细胞，且血小板损失量较大，使得最后所得到的血小板的纯度及回收率均偏低。

鉴于此，本实施方式提供一种血小板的制备方法，其包括：

S1:将抗凝全血样品进行第一次离心后，得到上层液。

抗凝全血样品是通过将新鲜采集的全血样品与抗凝剂混合制得。例如，进一步的，抗凝全血样品可以是通过用含抗凝剂的采血管采集静脉血得到，比如用枸橼酸钠抗凝管采集静脉血。为了使血小板的分离纯化效果更佳，在本发明中，选用较少量的抗凝全血样品，比如选用体积为10～15mL的抗凝全血样品。通常在采血后，在室温下运输采集的全血样品，尽量避免剧烈震荡，并尽可能在较短的时间内进行血小板的分离，以得到较高的回收率。