[发明专利]针对PCSK9抗体与检测试剂盒的制备及其用途

说明书

本发明公开了一种抗人前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)单克隆抗体以及包含该抗体的人PCSK9检测试剂盒的制备方法及其用途。本发明公开了抗PCSK9单克隆抗体的氨基酸序列及其编码基因、包含载体的宿主细胞及其制备方法。本发明以该抗体为基础，提供了一种针对作为抗原的人PCSK9的抗体‑三明治式ELISA方法和试剂盒，用以检测生物学样品中的PCSK9水平，并可以用作临床用药指导、诊断/预测的指标。

说明书

技术领域

本发明涉及诊断试剂领域，具体涉及利用抗体及包含抗体的试剂盒用于临床检测。

背景技术

前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)是kexin样前蛋白转化酶枯草溶菌素家族的第9个成员，由692个氨基酸残基组成，分为信号肽、前结构域、催化结构域、羧基末端结构域；主要表达于肝脏、肾脏以及小肠。PCSK9的合成发生在内质网，后经内质网转运至高尔基体，并在高尔基体中经一系列修饰后分泌入血。目前认为，只有肝脏分泌的PCSK9可以分泌入血，并与肝细胞表面的低密度脂蛋白受体(LDLR)结合，介导LDLR降解，调节血浆胆固醇水平。作为低密度脂蛋白受体(LDLR)的负调节剂，过量PCSK9与肝细胞表面LDLR结合后可加速其降解，导致肝细胞对低密度脂蛋白-胆固醇(LDL-C)的摄取下降，进而增加外周循环的LDL-C水平，最终使血液中胆固醇水平升高。因此，通过抑制PCSK9的功能来降低LDL-C给降脂治疗提供了一条新的思路。

高胆固醇血症分为家族性和非家族性，但均属于脂质代谢疾病，是冠状动脉疾病发生的重要危险因素。他汀类药物目前是治疗高胆固醇血症最为成功的药物，但一些不能耐受他汀类药物以及LDL-C水平过高的患者，其脂质水平始终不能达到预期目标。重要的是，大量研究证实，高胆固醇血症患者血清PCSK9水平显著升高，而且服用他汀类药物的患者血清PCSK9水平显著高于未服用他汀类药物患者。因此，血清PCSK9的检测不仅成为PCSK9抑制剂药物使用前的必须检测的临床指标，也将成为临床指导他汀类药物使用的必检项目。此外，血清PCSK9水平升高与年龄、TC、LDL-C、TG等动脉粥样硬化危险因素关系也十分密切，PCSK9与胆固醇以及LDL-C将并行成为诊断冠心病的重要标准。最近几年，对雌激素水平低下的更年期妇女血清检测发现，其PCSK9水平显著升高，提示PCSK9可能成为预测更年期女性患者冠心病危险因素的检测指标。预计PCSK9将作为一个非常重要的检测指标用于临床，且具有重大的临床意义并能产生长期的经济效益。

目前，国外已发展了多个针对PCSK9靶点的治疗性单克隆抗体，如Sanofi/Regeneron的alirocumab，Amgen的evolocumab，均在临床试验中显示良好的疗效，并于2015年内先后在美国和欧洲获批上市，但尚无应用针对PCSK9试剂盒进行该类药物或他汀类药物的临床指导检测；且国内亦未见有关生物学样品中PCSK9检测试剂盒的研究报道或发明专利申请。国外虽有用于科研的商品化人PCSK9检测试剂盒(如RD公司，DYC900)上市，但尚无其用于临床生物学样品检测的研究数据或证明，且价格昂贵，若应用于临床检测将大幅增加了临床诊疗成本。

本发明提供了一种能特异性结合人PCSK9的单克隆抗体，以及包含该抗体的人PCSK9检测试剂盒的制备方法及其用途。

发明内容

本发明的目的之一是提供一种抗PCSK9的重组单克隆抗体及其编码基因。其具体序列如下：

鼠源抗体轻链氨基酸如序列表中的SEQ ID NO：1所述；

鼠源抗体重链氨基酸如序列表中的SEQ ID NO：3所述；

嵌合抗体轻链氨基酸如序列表中的SEQ ID NO：5所述；

嵌合抗体重链氨基酸如序列表中的SEQ ID NO：7所述；

编码所述上述融合蛋白核苷酸序列如下：

鼠源抗体轻链核苷酸如序列表中的SEQ ID NO：2所述；