[发明专利]结核分枝杆菌Rv0189c重组蛋白、制备方法及其在结核病诊断中的应用

说明书

技术领域

本发明属诊结核病诊断技术领域，具体涉及结核分枝杆菌Rv0189c重组蛋白、制备方法及其在结核病诊断中的应用。

背景技术

结核病是当今全球面临的主要公共健康问题之一，它的病原体是结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)，属分枝杆菌属。近年来，由于耐药结核病、人类免疫缺陷病毒(HIV)合并结核分枝杆菌感染、大规模人口流动等问题的出现，结核病疫情出现加重的趋势。目前，全球每年约有900万人发展成活动性结核，200万～300万人死于结核病。据估计，目前全世界约有1/3的人口感染了Mtb，其中绝大多数为潜伏性结核感染(latent tuberculosis infection,LTBI)，即机体的免疫系统能够控制结核杆菌的复制而不发展成为结核病，但又不能将其彻底清除的状态。此时结核杆菌处于潜伏状态，在在免疫力低下者中，结核杆菌能够重新复制，发展成为活动性肺结核从而成为新的传染源。感染者终生约有5％～10％的风险发展成为活动性结核病，若同时伴有HIV的感染，这种概率则高达每年10％，远高于HIV阴性者。流行病学调查显示约有85％～90％新诊断的活动性肺结核系结核菌素试验阳性的LTBI演变而来。因此，对LTBI者的进行早期诊断和预防性治疗，既能够减少已感染结核杆菌者的发病机会，又可以通过影响发病，来减少结核杆菌在人群中的传播。

为了控制结核病的疫情，急需有效地诊断方法来诊断活动性结核病和潜伏性结核感染。目前结核病确诊的主要依据依然是细菌学检查(包括培养和涂片)。但结核杆菌的培养需要很长的时间(6～8周)，不利于临床结核病的诊断和治疗；痰涂片法虽然简便、快速，但是敏感性很低，平均检出率只有25％～35％。此外，对于肺外结核(如骨关节结核、淋巴结核等)细菌学检查阳性率普遍偏低，有时还存在取样的困难。潜伏性结核感染的特点决定了其无法被细菌学方法检出。目前诊断LTBI应用最为广泛的方法仍是结核菌素试验(TST)，TST所使用的抗原PPD，是从结核分枝杆菌粗提的抗原混合物，其中有200多种抗原成分与卡介苗(BCG)和非结核分枝杆菌的抗原成分相同，容易发生交叉反应，使TST方法出现了较高的假阳性率，诊断的特异性较低。此外，TST对于近期免疫受抑制的病人特别是合并HIV感染、重症疾病者、年幼儿童及营养不良者，缺乏足够的灵敏度。

自1976年Hassau等建立用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测抗结核分支杆菌抗体的方法以来，结核病的血清学诊断方法得到飞速发展，技术日益成熟，并得到了越来越广泛的应用。血清学诊断具有快速、简便、低廉且不需要活细胞等优点。这些年来，在血清学诊断抗原方面的研究已经取得了相当大的进步，确认了几个很有希望的血清学抗原，如38kDa,Lipoarabinomannan(LAM)，16kDa(Rv2031c),MTB81(Rv1837c),ESAT-6(Rv3875),Antigen 85B(Rv1886c),Antigen60以及选取不同蛋白的融合蛋白等.目前已有数种商品化的结核血清学诊断试剂盒，包括应用结核抗原Antigen 60的Anda-TB检测(Anda Biologicals，Strasbourg,France)，应用LAM及38kDa抗原的Pathozyme Myco及应用38kDa和16kD抗原的Pathozyme TB Complex Plus(Omega Diganostics,Allo,Scotland,UK)及应用LAM抗原的MycoDot(Blackstone,Massachusetts,USA)。对现有商品化试剂盒的meta分析表明,无论是在肺结核还是肺结核的诊断中，现有的商品化血清学检测方法均未达到理想的诊断效果。因此，发现新的血清学诊断抗原标志物，并建立新的结核病免疫诊断方法是结核病诊断所急需的。

发明内容

为了克服目前结核杆菌免疫诊断方面存在的问题，本发明的目的在于提供一种结核分枝杆菌Rv0189c重组蛋白及其制备方法，将其应用于结核病的诊断，使得诊断具备较高的敏感性和特异性，并且更为快速和安全。

本发明提供一种结核分枝杆菌Rv0189c重组蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。

本发明所述的Rv0189c蛋白能够制备诊断试剂，用于结核病的免疫检测。

本发明中所述的蛋白除了通常所指的一种氨基酸聚合物，还应该包括其类似物如多肽。多肽可与上述蛋白序列同源，这个类似物能够与蛋白同样结合到相同的抗体分子上，且类似物中处于等价位置上的氨基酸与原始肽中的那些抗原序列相同或保守。