[发明专利]随机测定含EPA链化合物的方法

权利要求书

1.随机测定含EPA链化合物的方法，其特征是包括以下步骤：

1)、样品前处理：

将鲫鱼肌肉组织洗净后研磨成糜，在糜中加入有机溶剂Ⅰ后震荡提取，提取完毕后加入纯水并震荡混匀；

所得的混合物用冷冻离心机离心，移取下相溶液，将该下相溶液干燥，得脂质粗提物；

冷冻离心机离心为：于4℃、8000～12000rpm离心5～15分钟；

有机溶剂Ⅰ为甲醇：氯仿＝1：2体积比的混合液或者为甲醇：二氯甲烷＝1：2体积比的混合液，糜与有机溶剂Ⅰ的料液比为1g/15～30ml；所加入水的量为有机溶剂Ⅰ的0.5体积倍；

2)、进样：

将脂质粗提物用甲醇：二氯甲烷＝1：2体积比的有机溶剂定容至100mL作为样品；

移取1mL样品过0.22μm滤膜后作为待测样液，使用针泵注射器注射进质谱；

针泵注射器流速为10～20μL/min；

3)、质谱检测：

使用负离子模式，根据特征子离子寻找所有含有该子离子的母离子，扫描范围为400-1000Da，驻留时间为2秒，气帘气为10psi，加速电压为-4500ev，辅助气Ⅰ为20psi，辅助气Ⅱ为30psi，图谱累加100～200次；使用Analyst软件采集数据；

所采用的扫描方法为子找母扫描，特征子离子为m/z 301，去簇电压为-80～-100ev，碰撞电压为-30～-40ev；

4)、数据分析：

将步骤3)质谱检测所得谱图进行分析，得各个离子峰的结构信息。

2.根据权利要求1所述的随机测定含EPA链化合物的方法，其特征是：

所述步骤4)为：

将步骤3)质谱检测所得谱图经过噪音过滤，基线扣除4Da，去同位素峰后，得到处理后谱图；将处理后谱图导出为txt文件后使用Lipid Mass Spec.Prediction软件鉴定，即可得到各个离子峰的结构信息。

3.根据权利要求2所述的随机测定含EPA链化合物的方法，其特征是：

所述步骤4)还包括：

各个母离子浓度经公式：计算，其中Abundance_i为化合物丰度，A_i为谱图中该特定离子峰的峰面积，A₁～A_n为谱图中所得的所有离子峰的峰面积。

4.根据权利要求1～3任一所述的随机测定含EPA链化合物的方法，其特征是：

所述步骤1)中，以移取下相溶液后的离心所得物替代水产品组织，以有 机溶剂Ⅰ中的二氯甲烷或者氯仿替代有 机溶剂Ⅰ；再重复提取1～3次；将所有提取后所得的下相溶液合并后进行后续的干燥和复溶。