[发明专利]一种饲料淀粉糊化度的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种饲料淀粉糊化度的检测方法。

背景技术

淀粉糊化度也叫淀粉熟化度，其糊化程度越高，表示饲料在加工过程中经过高温和高压的作用成熟的程度越高。现在，很多饲料的生产采用膨化处理，饲料原料经膨化处理后，糊化度和香味增加，适口性提高，能刺激动物食欲。同时，使淀粉、蛋白质、脂肪等有机物的长链结构变为短链结构的程度增加，故变得更易消化。

目前，饲料中淀粉糊化度的测定主要是由美国大豆协会熊易强博士根据美国饲料工业界普遍采用的测定方法简化而来（方法来源：熊易强.饲料淀粉糊化度(熟化度)的测定[J].饲料工业，2000，21(3):30-31）。淀粉与水共热后，体积膨大，粘度上升，成为非结晶性淀粉，该状态下易被糖化酶水解成为葡萄糖，上述方法测定饲料淀粉糊化度就是利用了淀粉的这一特性。其中，水解后的葡萄糖用还原糖的方法测定，但是还原糖并非葡萄糖一种，所以有时候饲料中其它的还原糖会对结果造成影响。

发明内容

本发明的目的在于提供一种饲料淀粉糊化度的检测方法，以消除其它还原糖对测定结果的影响，使结果更为准确。

为了达成上述目的，本发明的技术方案是：

一种饲料淀粉糊化度的检测方法，包含以下步骤：

步骤（1），取样：称取两份过40目筛质量相同的饲料样品，精确至0.0001g；

步骤（2），称取一定质量的葡萄糖标准品，用100mL容量瓶加水定容，得到标准溶液；

步骤（3），样品处理：分别将两份步骤（1）中的样品置于加入50mL无水乙酸钠-乙酸缓冲液的150mL锥形瓶中，取其中一份样品于水浴锅中沸水浴加热40min±4min，然后用自来水冲淋冷却，即为全糊化样品，另外一份为不完全糊化样品；分别向两个锥形瓶中加入2mL糖化酶溶液，于40℃水浴锅中加热40min±4min，然后分别加入2mL硫酸溶液，摇匀后依次加入2mL钨酸钠溶液，再次摇匀；将两个锥形瓶中的液体分别转移至100mL容量瓶中加水定容后用滤纸过滤，收集滤液，得到两份待测溶液；

步骤（4），将标准溶液和两份待测溶液利用液相色谱进行检测，得到葡萄糖标准品及待测溶液中各组分的保留时间及峰面积；饲料样品的淀粉糊化度即为：(不完全糊化样品葡萄糖峰面积/完全糊化样品葡萄糖峰面积）×100%。

其中，步骤（1）中饲料样品称样量控制在0.4-1g之间为宜，另外，本方法同样适用于饲料原料（如膨化玉米）淀粉糊化度的测定。

其中，步骤（2）中葡萄糖标准品称样量为0.0500-0.1000g，精确至0.0001g，为判定待测样中葡萄糖出峰时间所用，仅通过葡萄糖标准品的色谱图来判断饲料样品中葡萄糖的出峰位置。

其中，本发明所用水（即所有试剂配制及流动相使用的水）均为去离子水。

其中，步骤（3）中无水乙酸钠-乙酸缓冲液配制方法如下：取4.1g无水乙酸钠溶于200mL水中，加3.7mL乙酸，用水定容至1000mL，溶液pH在4.4-4.7之间即可。

其中，步骤（3）中硫酸溶液和钨酸钠溶液为蛋白沉淀剂，可除去试样中的蛋白。硫酸溶液配制方法：将10mL浓硫酸用水稀释至100mL；钨酸钠溶液配制方法：取12.0g钨酸钠溶于100mL水中。

其中，步骤（3）中所使用的糖化酶酶活为12000U/g。酶溶液配制方法如下：取1g复合淀粉酶溶于10mL步骤（3）中无水乙酸钠-乙酸缓冲液，反复震荡后，过滤，取滤液，现用现配。如按照本发明操作时，可根据所使用糖化酶实际酶活进行计算，配制的酶溶液酶活以不低于本发明为准。

其中，步骤（4）所述的液相色谱以水为流动相，所述液相色谱采用等度洗脱方式。

采用上述方法后，与现有技术相比，本发明的有益效果体现在以下几方面：

（1）可以消除其它还原糖对测定结果的干扰；

（2）使用液相色谱测仪测定可以处理更多的样品，一定程度上提高了工作效率；

（3）测定结果计算公式简单，只需葡萄糖峰面积比即可得出结果。

总之，本发明将待测饲料样品用糖化酶水解后，利用液相色谱对葡萄糖进行测定（葡萄糖峰面积反映样品中葡萄糖的含量），可以有效消除其它还原糖对测定结果的影响，从而使结果更为准确。

附图说明

图1为葡萄糖标准品色谱图；

图2为不完全糊化样品色谱图；

图3为完全糊化样品色谱图。

具体实施方式