[发明专利]一种从积雪草出发制备积雪草苷、羟基积雪草苷和积雪草苷B的方法

说明书

本发明涉及一种从积雪草出发制备积雪草苷、羟基积雪草苷和积雪草苷B的方法。包括：1)取积雪草，用水提取，滤过离心，上大孔树脂，碱溶液洗涤，水洗至中性，洗脱，浓缩，喷雾干燥；2)用甲醇溶解喷雾粉，滤过，析出结晶物，滤过，反复析晶，得到结晶物，干燥得积雪草苷；3)析晶的母液回收溶剂和水液合并滤过，上柱，水洗至流出液颜色变淡，再依次用30％、60％甲醇洗脱，收集洗脱液，浓缩，溶解，滤过，析晶，重复析晶，溶解，柱层析，洗脱，得羟基积雪草苷；4)30％甲醇洗脱液的母液回收溶剂，反复溶解、滤过、析晶，柱层析，洗脱，得积雪草苷B。本发明从积雪草药材出发，不涉及毒性大的溶剂，具有环保、对仪器设备要求不高等优点。

技术领域

本发明属于中药制备分离技术领域，具体地说，涉及一种从积雪草出发制备积雪草苷、羟基积雪草苷和积雪草苷B的方法。

背景技术

积雪草Centella asiatica(L.)Urban，又名胡薄荷、地钱草等，为伞形科积雪草属植物，广泛分布在南非、印度以及我国长江流域以南各地，是一种传统中草药。据研究报道，积雪草具有消炎、增强记忆力、促进胶原蛋白合成、抗抑郁和抗癌等多种生理活性。

积雪草的化学成分复杂，主要有三萜类、黄酮类、挥发油类、多炔烯类等。目前认为，积雪草的主要活性成分为积雪草总苷，积雪草总苷是一种混合物，主要由三萜烷酸形成的糖苷组成，包括积雪草苷-B、羟基积雪草苷和积雪草苷，它们都具有五环三萜结构和糖苷支链，仅在三萜环上的羟基数目和位置存在着差异。虽然它们的结构及其相似，但生物活性却不尽相同，其中羟基积雪草苷具有消炎和治疗风湿性关节炎等活性；积雪草苷能够促进伤口的愈合，对烧伤性瘢痕有明显的治愈作用，常作为评价积雪草药理活性的标识性成分；由于积雪草苷-B纯品难以获得，关于它的药理活性还未见报道。

积雪草是三金片的主要药味，其皂苷类成分是主要活性物质，其中的积雪草苷、羟基积雪草苷和积雪草苷B三个成分占到总皂苷的70％左右，对其进行含量测定对产品的质量控制有积极意义。羟基积雪草苷和积雪草苷B为五环三萜皂苷类化合物，二者互为同分异构体，极性相似，分离和纯化难度大，目前市面没有积雪草苷B的对照品供应。

CN101724006A公开了一种分离积雪草苷-B、羟基积雪草苷和积雪草苷的方法，包括：将原料溶于甲醇水溶液后通入模拟移动床色谱系统，用甲醇水溶液洗脱得到积雪草苷，提余液蒸除溶剂后得到一次固体料；将一次固体料溶于含乙腈和甲基叔丁基醚的水溶液或通入模拟移动床色谱系统，用含乙腈和甲基叔丁基醚的水溶液洗脱得到羟基积雪草苷，提余液蒸除溶剂后得到二次固体料；将二次固体料溶于甲醇水溶液后通入模拟移动床色谱系统，用甲醇水溶液洗脱得到积雪草苷-B。然而，该方法从含积雪草总苷的原料出发，采用模拟移动床色谱系统，其操作复杂，对设备要求高，且使用甲基叔丁基醚，具有一定的毒性和危险性，在储存和使用过程中都需要充分重视。

CN102477063公开了制备型高效液相色谱仪分离积雪草提取物中的积雪草苷B与羟基积雪草苷的方法，在流动相内添加环糊精，再用有机溶剂萃取去除溶剂中的环糊精得到纯品，该方法操作复杂，添加β-环糊精的溶剂容易造成色谱柱堵塞，降低色谱柱的使用寿命，成本高，不易工业化生产。CN102532244A公开了制备高纯度积雪草苷的方法，通过萃取、脱色、重结晶的方法得到积雪草苷纯品，但工艺中采用多种有机溶剂对积雪草提取物浸膏进行萃取，有机溶剂用量多，容易造成二次污染。CN101948501A公开了一种羟基积雪草苷的制备方法，提取液经大孔树脂柱层、活性炭脱色、析晶、大孔树脂再层析，最后得到98％以上纯度羟基积雪草苷，该工艺周期长，工艺复杂，成本高。