[发明专利]一种有效净化水质的益生菌制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及的是水产养殖技术领域，具体的说是一种有效净化水质的益生菌制备方法。

背景技术

随着水产养殖业的迅猛发展，集约式养殖规模日益扩大，由于该模式养殖密度高，投喂量大，再加上投喂方式不合理，导致大量的饲料残留，使水体富营养化，藻类过度繁殖而导致养殖水体严重缺氧，同时养殖动物粪便及残体沉积水中，在厌氧环境下被分解产生硫化氢、氨氮、亚硝酸盐等有毒中间物质，导致水质恶化，有害微生物滋生，严重影响我国水产养殖业的长远发展。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术的缺陷和不足，提供了一种有效净化水质的益生菌制备方法，芽孢杆菌能迅速降解养殖池中的有机物，有效改良水质，而且芽孢杆菌还具有无毒副作用、无残留、不产生抗药性、稳定性好等优势。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：

一种有效净化水质的益生菌制备方法，其方法是：从对虾养殖池中采集水样、底泥、粪便样品以及对虾肠道中分离筛选芽胞杆菌菌群，经过80℃水浴、氨氮培养基筛选得到菌株，再用形态学特征、生理生化特性结果和16S rDNA进行鉴定，通过安全性试验对其进行初步研究，筛选出具有优良特性的土著海水芽孢杆菌。

本发明的有益效果为：筛选出的芽孢杆菌可以降低水中氨氮和亚硝酸盐的含量，进而对对虾体内免疫酶活性产生影响，也能够起到促进对虾机体免疫能力的作用，其在微生态制剂应用中具有广阔的应用前景。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1是本发明筛选的JNSY1菌株对养殖水体氨氮含量的影响；

图2是本发明筛选的JNSY1菌株对养殖水体亚硝酸盐含量的影响；

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及具体实施方式，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施方式仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

一、菌株分离和筛选：

(1)、取5g样品，加入盛有45ml无菌生理盐水的三角瓶中。悬浮液于80℃下保持20min，杀死不能形成芽孢的其他菌体。

(2)、取5ml处理过的悬浮液接入到装有45ml富集培养基的三角瓶内，37℃富集培养24h～48h。

(3)、取1ml富集培养后的菌液，用无菌水稀释梯度至10^-1、10^-2、10^-3、10^-4、10^-5、10^-6、10^-7，稀释度为10^-6、10^-7的菌悬液各取100μL涂布在分离培养基上，37℃培养24h。

(4)、挑选生长良好的菌落划线分离，重复2-3次后挑选优势菌落4℃斜面保存待用。

(5)、得到的各芽孢杆菌菌株，用1％的无菌生理盐水稀释后，将稀释的菌液用涂布棒平板涂布到氨氮降解菌筛选培养基上，30℃，24h培养，观察菌种长势，挑取菌落大、生长速度快的优势菌株保种备用。

(6)、经过富集、分离和纯化，得到8株细菌，分别编号为HDSY1、YKSY1、JNSY1、YKCD1、HDCD1、JDCD1、HDFB1、JNFB1和YKFB1。经活化后的8株菌接种到筛选培养基上，30℃培养24h后，观察发现菌株JNSY1菌落大、生长速度快。因此选择JNSY1为试验菌株。

二、菌株鉴定：

1、挑取单菌落纯化，在营养琼脂培养基上染色镜检，JNSY1菌株单菌落为白蜡状表面光滑的乳白色圆形突起，直径约2mm；革兰染色为阳性，呈长杆状。

2、取1ml富集菌落培养液于离心管中，12000r/min离心5min。去掉上清液然后加入100ul无菌水混合，100℃水浴加热10min，冰浴2min，12000r/min离心5min，上清液即为该菌DNA模板。