[发明专利]一种有效增强对虾免疫力和抗病力的中草药复合液

说明书

技术领域

本发明涉及的是中草药复合液技术领域，具体的说是一种有效增强对虾免疫力和抗病力的中草药复合液。

背景技术

随着集约化、高密度养殖的迅速发展，水产疾病频繁暴发，目前都是依赖于使用大量的化学药物和抗生素来解决，这造成了许多问题，不仅会使细菌等病原微生物对这些药物产生抗药性，而且药物的长期使用也会使养殖品种的质量下降，导致严重的药物残留，而药物残留对人体构成许多如脏器受损等潜在的威胁。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术的缺陷和不足，提供了一种有效增强对虾免疫力和抗病力的中草药复合液。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：

一种有效增强对虾免疫力和抗病力的中草药复合液，制备方法如下:

1、黄芪回流提取：取黄芪原料10g，粉碎，加入150ml无水乙醇，水浴中保持沸腾回流提取约1.5h，放冷后过滤；在药渣中分别添加100、50ml无水乙醇提取2次，过滤，合并滤液，旋转蒸发仪浓缩，温度设定50℃并回收乙醇，浓缩至10ml，4℃保存备用；

2、黄岑水煎的提取：称取黄岑药材10g，加150ml蒸馏水浸泡30min，加热至沸腾文火保持30min，用六层纱布过滤，药渣再加100ml蒸馏水，加热至沸腾文火保持30min，六层纱布过滤，合并2次滤液，旋转蒸发仪浓缩，温度设定55℃，115℃高压灭菌20min，4℃保存备用；

3、中草药复合液的制备方法：将1和2的液体，按1:1的比例进行混合，将无水乙醇换为60％乙醇提取中草药材有效成分，其他条件不变，制备得到中草药复合液。

本发明的有益效果为：该中草药复合液是在提取中草药有效成分的基础上，优化配伍复合而成，不仅可以保障药效的稳定性，还可以使得剂量精准控制，对对虾养殖中的常见细菌病有良好的效果，具有无毒、无药物残留、使用安全方便、功能全面等优点。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合具体实施方式，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施方式仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

实验所用中国对虾、凡纳滨对虾购于青岛市红岛东大洋养殖场。两种养殖对虾生物体长均为8.5±0.5cm，体色正常，健康活泼。暂养驯化7天，海水盐度为30，pH为8.5，温度为22±0.5℃，连续充气，日换水2次，换水量为1/3-1/2，并投喂对虾配合饲料。

设对照组和实验组，每组4个重复，实验组用添加了中草药浸泡后的饲料饲喂，对照组饲喂未添加中草药的饲料，保持水温、供氧、饲喂条件等一致，养殖30天。定期测定抗菌活力(副溶血弧菌和哈维氏弧菌)、酚氧化酶和溶菌活力等指标。

1、样品制备

用消毒的5号针头和2毫升注射器由头胸甲后插入心脏取血，注射器中预先加入已消毒的预冷抗凝剂,使血液与抗凝剂最终比例为1：1，血液置于冰箱(4℃)中保存过夜；低速离心(2000-3000r/min)10-15min,将析出的蓝色血清倾出，进行各项指标的测定。

2、测定方法

溶菌活力和抗菌活力测定分别以溶壁微球菌(Micrococcus lysoleikticus)冻干粉和副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)、哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)为底物，参照Hultmark等改进的方法[10]；酚氧化酶活力的测定以L-DOPA为底物，按Ashida的方法[11]进行。以上各种方法均有改进。

3、抗菌活力测定

菌悬液的制备：实验所用细菌为副溶血弧菌、哈维氏弧菌。将菌种接种于2116E斜面固体培养基上，30℃下培养18-20小时。然后用0.1mol/L,pH＝6.4的磷酸钾盐缓冲液从固体斜面上将菌洗下作为底物，并配成一定浓度的悬浊液(O.D.570nm＝0.3—0.5)。

抗菌活力测定:分别取3ml上述悬浊液于试管内置于冰浴中，再各加入50μl待测血清混匀，测其保温前试液在570nm波长处的光密度值(A0)。然后将试液移入37℃温浴中30min，取出后立刻再置于冰浴内10min以终止反应，测其经温浴后的试液在570nm波长处的光密度值(A)。抗菌活力按下式计算：

Ua2＝(A0-A)/A

(注：为消除血蓝素的干扰，用空白血清为对照，于570nm波长处测其的光密度值，以校正A0、A值。)

3.2.2.2溶菌活力测定