[发明专利]一种HIV抗原抗体检测卡及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物监测技术领域，具体涉及一种HIV抗原抗体检测卡及其制备方法。

背景技术

艾滋病，全名为“获得性免疫缺陷综合症”(Acquired Immune Deficiency Syndrome)，英文缩写AIDS，是人体感染了人类免疫缺陷病毒(Human immunodeficiency virus,HIV)所导致的传染病。HIV本身并不会引发任何疾病，而是当免疫系统被HIV破坏后，人体由于失去抵抗能力而感染其他的疾病导致死亡。

HIV的感染可通过检测HIV特异性抗体、抗原、核酸或病毒分离培养加以确立，常规使用的标准诊断项目是血清学抗体检测。从1985年第一代HIV抗体检测试剂问世到现在，HIV血清学检测试剂已经发展到了第四代。1998年，国际上出现第四代HIV检测试剂，它可同时检测抗体和p24抗原，又称为HIV抗原/抗体诊断试剂。

生物素-亲和素系统(Biotin-Avidin-System，BAS)是一种具有高亲和力、灵敏度高、特异性强和稳定性好等优点的信号放大标记技术，BAS具有高灵敏度、高特异性、高稳定性和适用性等特点。生物素易与蛋白质和核酸类等生物大分子结合，形成的生物素衍生物，不仅保持了大分子物质的原有生物活性，具多价性。此外，每个亲和素分子有四个生物素结合部位，可同时以多价形式结合生物素化的大分子衍生物和标记物。因此，BAS具有多级放大作用，使其在应用时可极大地提高检测方法的灵敏度。

目前，现有技术已实现HIV抗原抗体的检测，但样本用量较大，大约需要60至100μL，灵敏度有待于提高。因此本发明人利用生物素-亲和素系统的优点，开发了一种HIV抗原抗体的检测卡。

发明内容

本发明的目的在于是：针对现有技术存在的不足，提供一种灵敏度高，样本用量少的HIV抗原抗体检测卡。

为了实现上述发明的目的，本发明的技术方案是：

一种HIV抗原抗体检测卡，所述检测卡包括卡盖、卡体和试纸条，所述卡盖上依次设有稀释液加样孔、样本加样孔、观测孔和安装标示孔，所述卡体的内部设有放置试纸条的凹槽；所述试纸条依次设有样品垫层、胶体金层、硝酸纤维素膜和吸水层，所述样品垫层固相有生物素标记的p24抗体，所述胶体金层固相有重组HIV-1/HIV-2抗原和鼠抗p24单克隆抗体的胶体金标记物；所述硝酸纤维素膜依次设有包被重组HIV-1/HIV-2抗原的检测线、包被亲和素的检测线和包被羊抗鼠IgG抗体的质控线。

作为一种优选的技术方案，所述卡盖和卡体为卡扣连接。

作为一种改进的技术方案，所述试纸条的样品垫层与所述卡盖的稀释液加样孔和样本加样孔相对应；所述试纸条的胶体金层和硝酸纤维素膜与所述卡盖的观测孔相对应。

本发明的另一个目的是提供一种HIV抗原抗体检测卡的制备方法。

为了实现上述发明的目的，本发明的技术方案是：

一种HIV抗原抗体检测卡的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：

(1)胶体金的制备

0.8～1.5wt％氯金酸水溶液100mL，加热至沸腾，加入0.8～1.2wt％柠檬酸三钠1.0mL，迅速混匀，继续煮沸10分钟，胶体金溶液变酒红色，冷却备用；

(2)胶体金的标记

2.1胶体金标记重组HIV-1/HIV-2抗原：取步骤(1)中制备的胶体金溶液50mL，用0.1mol/L K₂CO₃调pH6.0～6.5，随后加入2～4mL浓度为0.8～1.2mg/mL的重组HIV-1/HIV-2抗原，搅拌2～5分钟，加入4～6mL质量分数为0.8～1.2％的PEG20000水溶液，于8000～12000r/min离心25～35分钟，吸去上清液，将沉淀悬浮于0.1～0.3mg/mL PEG20000的水溶液中，以0.5mg/mL叠氮钠防腐，置3～5℃保存；

2.2胶体金标记鼠抗p24单克隆抗体：取步骤(1)中制备的剩余胶体金溶液50mL，用0.1mol/L K₂CO₃调至pH8.9～9.2，随后加入4～6mL浓度为0.8～1.2mg/mL的鼠抗p24单克隆抗体，搅拌2～5分钟，加入4～6mL质量分数为0.8～1.2％的PEG20000水溶液，于15000r/min离心35～45分钟，吸去上清液，将沉淀悬浮于浓度为0.4～0.6mg/mL PEG20000的水溶液中，以0.5mg/mL叠氮钠防腐，置3～5℃保存；

(3)生物素标记p24抗体