[发明专利]一种利用非靶标代谢组学技术鉴别洋槐蜜产地的方法

说明书

技术领域

本发明涉及蜂蜜产地鉴别技术领域，尤其涉及一种筛选用于鉴别蜂蜜产地的特征标志物的方法，还涉及利用该特征标志物进行蜂蜜产地鉴别的方法。尤其涉及一种筛选用于鉴别洋槐蜜产地的特征标志物的方法，以及洋槐蜜产地的鉴别方法。

背景技术

我国是世界养蜂大国，蜂蜜年产量超过45万吨，是蜂蜜生产、消费和出口大国。研究表明，蜂蜜含有近百余种内源性成分，葡萄糖和果糖占总成分含量的70％以上，其次是水分、蔗糖、矿物质、维生素、蛋白质、氨基酸等。近几年，消费者对蜂蜜的兴趣与日俱增，这主要是因为蜂蜜有益健康，比如抗菌、抗炎、抗突变、抗肿瘤、抗氧化活性。蜂蜜成分与其植物源和地理源密切相关，因为蜂蜜成分容易受到生产地区土壤和气候特性的影响。相比于杂花蜜，单一植物源和地理源的蜂蜜能够提供一种独特的口味和质量属性而具有更高的价值。在销售环节中，消费者也非常关注具有特定产地真实标签的蜂蜜，所以蜂蜜的质量和价格取决于其植物源和地理源。因此，对不同产地的蜂蜜进行鉴别对消费者具有重要意义。

已有的鉴别不同植物源和产地的蜂蜜技术包括孢粉学、指纹识别、化学统计分析和标记物识别。孢粉学主要通过显微镜观察花粉的大小、形状和颜色，但是这种方法非常难掌握并且容易得出不同的花粉具有相同的花粉特征这种错误的结果，这主要是由于该方法极易受检验人员主观因素影响而导致分析偏差。基于能够反映不同化学成分特征轮廓的色谱和指纹识别技术已经被认为是一种可靠的蜂蜜样品质量控制技术。但是获得可靠的指纹图谱比较困难，因为在不同的实验室和不同批次样品之间，实验条件难以完全重现，大量低含量化合物的基线、响应值和保留时间就会导致偏差。并且尽管指纹识别技术全面展示了样品信息，并没有对从数据中获得的信息进行深入挖掘。化学统计计量学在分析庞大的数据特别是复杂数据的大样本集，分析植物源和地理源，并建立可靠模型方面体现出巨大优势。但是，这种方法需要大量的样本建立一个可靠的模型，而确定样品真实性又依赖于所开发的模型，实际应用十分困难。

特征标记物可以简单方便地对蜂蜜进行溯源分类。现有的蜂蜜鉴别方法均基于在初步假设某一类化合物的基础上，将某一个目标代谢物在作为潜在的标志物。如基于多种仪器技术将酮类化合物、酚类化合物；碳水化合物、矿物质和微量元素、挥发性化合物、有机酸、氨基酸等内源性化合物，以及脱落酸、橙皮素、邻氨基苯甲酸甲酯和3-氨基苯乙酮等特殊化合物作为标记物，来确定蜂蜜的植物源和地理源。但是，蜂蜜是一种由蜜蜂生产的天然的并且组分极其复杂的产品，根据植物源和地理源不同而具有多种大量的内源性化合物。因此，根据事先主观假设的一类化合物寻找出某一种可靠的标志物鉴别其植物源和地理源是十分有限也不科学的。

然而采用非靶向比较代谢组学探索特定的标记物可以解决这个问题。非靶向代谢组学通过分析数据集中的全部信息尽可能多的获得一个复杂样品中的代谢产物。利用与库匹配的多元统计技术，非靶向代谢组学已经广泛应用通过来自分析不同条件下的不同样品的大量数据来确定标志物方面。核磁共振技术和高分辨质谱技术在非靶向代谢领域作为主要的技术手段，通过评估代谢水平的变化来反映基质本身的变化和环境影响。核磁共振的主要优势在于无损样品既可获得大量数据。最近，液相色谱或气相色谱于质谱联用在非靶向分析确定代谢物中得到广泛应用，因为该技术能够在前端的分离系统中将各种化学组分在复杂的混合物中分离出来，并在后端的质谱系统中获得准确的质量信息。

发明内容

以往蜜蜂产地的鉴定方法都集中于某一类物质(如黄酮类、酚酸类、有机酸类等)的分析，即通过购买标准物质，然后对样品中该物质进行定量分析，依据该物质在不同产地蜂蜜样品中的含量是否存在差异确定该标准物质能否作为特征标志物，这被称为靶标技术。靶标技术寻找特征标志物的范围十分的有限，不能探寻出真正的特征物质。本发明提供的蜂蜜产地鉴别方法是基于非靶标技术，即从蜂蜜样品的全谱图中搜寻特征标志物，特征标志物的确定更加客观精准，筛选得到的特征标志物更具有说服力。同样地，利用该特征标志物对不同产地的蜂蜜进行鉴别，鉴别结果也更加精准。

为了实现上述目的，本发明的技术方案之一是：一种筛选用于鉴别蜂蜜产地的特征标志物的方法，包括如下步骤：

(1)取来自两个已知不同产地的相同蜜源蜂蜜样品，相同产地的若干蜂蜜样品为一组；以纯水为溶剂，分别对每组中的蜂蜜样品进行溶解，得多个标准样品，备用；