[发明专利]定向微孔胶原/壳聚糖/丝素蛋白复合支架及其制备方法

权利要求书

1.一种定向微孔胶原/壳聚糖/丝素蛋白复合支架，其特征在于：以胶原、壳聚糖和丝素蛋白为主要原料制得，所述胶原、壳聚糖和丝素蛋白的质量比为1:1:1~7；所述复合支架本体为圆柱体，其横截面为圆形，横截面的直径为5 mm。

2.根据权利要求1所述一种定向微孔胶原/壳聚糖/丝素蛋白复合支架，其特征在于：所述胶原来源于鱼皮、猪皮、牛皮或牛腱；丝素蛋白为蚕茧中提取。

3.一种如权利要求1所述定向微孔胶原/壳聚糖/丝素蛋白复合支架的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：

（1）提取丝素蛋白并配制成丝素蛋白悬浊液；

（2）分别将胶原、壳聚糖溶于冰醋酸中制备成胶原悬浊液和壳聚糖悬浊液；

（3）将步骤（2）所得胶原悬浊液与壳聚糖悬浊液漩涡搅拌混合均匀；

（4）将步骤（1）所得的丝素蛋白悬浊液缓慢加入步骤（3）的混合漩涡悬浊液中，混合均匀；随后进行抽真空处理，之后再静置6 h，得到胶原/壳聚糖/丝素蛋白凝胶状悬浊液；

（5）将步骤（4）配制的胶原/壳聚糖/丝素蛋白凝胶状悬浊液注入复合支架成型模具中，进行注模和冷淋固型处理后，再进行冻干成型处理制得定向微孔胶原/壳聚糖/丝素蛋白复合支架；

（6）采用京尼平和乙醇混合溶液对步骤（5）制得的定向微孔胶原/壳聚糖/丝素蛋白复合支架进行交联及灭菌处理。

4.根据权利要求3所述一种定向微孔胶原/壳聚糖/丝素蛋白复合支架的制备方法，其特征在于：步骤（1）中所述丝素蛋白悬浊液浓度为2.4wt%；步骤（2）所述胶原悬浊液浓度为0.6wt%，壳聚糖悬浊液浓度为2wt%，冰醋酸浓度为1vt%。

5.根据权利要求3所述一种定向微孔胶原/壳聚糖/丝素蛋白复合支架的制备方法，其特征在于：步骤（1）所述丝素蛋白悬浊液的制备方法如下：

（A）将剪碎的蚕茧放入质量分数为0.5% Na₂CO₃溶液中，在98±2℃水浴中放置30 min，去除蚕茧上胶质，反复操作3次后烘干，得到丝素；

（B）称取步骤（A）所述的丝素，在78℃下，在CaCl₂/H₂O/C₂H₅OH混合溶液中溶解，纱布过滤，得到粗滤液；所述CaCl₂/H₂O/C₂H₅OH混合溶液的中CaCl₂、H₂O和C₂H₅OH的摩尔比为1:8:2；所述丝素与CaCl₂/H₂O/C₂H₅OH混合溶液的质量比为1:25；

（C）将步骤（B）所得粗滤液倒入透析袋中透析3 d，除去氯化钙和乙醇；再过滤，得到丝素蛋白悬浊液；所述透析袋的截留分子量为8000-14000。

6.根据权利要求3所述定向微孔胶原/壳聚糖/丝素蛋白复合支架的制备方法，其特征在于：所述步骤（5）具体按照以下步骤实施：

（D）将胶原/壳聚糖/丝素蛋白凝胶状悬浊液注入复合支架成型模具中，以铁棒封闭复合支架成型模具的两端；

（E）以垂钓的方式将复合支架成型模具顺轴向缓慢并匀速浸入液氮中，对注入复合支架成型模具中的胶原/壳聚糖/丝素蛋白凝胶状悬浊液进行冷淋固型处理，待复合支架成型模具完全侵入液氮后，继续在液氮中保留10 h～14 h；

（F）将复合支架成型模具连同内部注入的胶原/壳聚糖/丝素蛋白凝胶状悬浊液一同转入-90℃～-70℃的冰箱中冷藏；

（G）将复合支架成型模具从-90℃～-70℃的冰箱中取出，迅速去除复合支架成型模具两端的铁棒；

（H）随后将复合支架成型模具放置于预冷好的冷冻干燥机冻干3 d；

（I）将经步骤（2）冻干后的复合支架成型模具放置于真空状态下并升温至室温，保持6 h后，解除真空状态；

（J）将复合支架从复合支架模具中取出，按不同的要求，裁剪成不同长度的复合支架，即制备得到定向微孔胶原/壳聚糖/丝素蛋白复合支架。