[发明专利]一种D-乳酸脱氢酶、含有该酶的工程菌株及其构建和应用在审
| 申请号： | 201710056240.7 | 申请日： | 2017-01-25 |
| 公开（公告）号： | CN109337878A | 公开（公告）日： | 2019-02-15 |
| 发明（设计）人： | 许平;李超;陶飞;唐鸿志 | 申请（专利权）人： | 上海交通大学 |
| 主分类号： | C12N9/04 | 分类号： | C12N9/04;C12N15/53;C12N1/21;C12P7/56;C12R1/10 |
| 代理公司： | 上海旭诚知识产权代理有限公司 31220 | 代理人： | 郑立 |
| 地址： | 200240 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 乳酸脱氢酶 乳酸 工程菌株 构建 地衣芽孢杆菌 基因工程改造 独特性质 发酵产物 发酵状态 高温发酵 工业应用 光学纯度 热稳定性 生产效率 脱硫杆菌 原料价格 丁二醇 光学纯 天然的 重定向 热性 微氧 厌氧 发酵 应用 高产 节约 改造 生产 | ||
1.一种D-乳酸脱氢酶，其特征在于，所述D-乳酸脱氢酶具有下列氨基酸序列之一：
1)SEQ ID No.1所示的氨基酸序列；
2)SEQ ID No.1所示的氨基酸序列通过一个或几个氨基酸残基的取代、缺失、插入或添加衍生产生的氨基酸序列，所述氨基酸序列产生的蛋白质具有D-乳酸脱氢酶活性；
3)SEQ ID No.1所示的氨基酸序列被保守性替换的氨基酸序列；
4)包含与SEQ ID No.1所示的氨基酸序列具有至少80％同源性的氨基酸序列。
2.一种核苷酸序列，其特征在于，所述核苷酸序列编码如权利要求1所述的D-乳酸脱氢酶。
3.如权利要求2所述的核苷酸序列，其特征在于，所述核苷酸序列具有下列核苷酸序列之一：
1)SEQ ID No.2所示的核苷酸序列；
2)SEQ ID No.3所示的核苷酸序列；
3)与SEQ ID No.2或SEQ ID No.3所示的核苷酸序列具有80％以上的同源性的核苷酸序列；
4)在高严谨条件与SEQ ID No.2或SEQ ID No.3所示的核苷酸序列的互补链杂交的核苷酸序列。
4.一种基因工程菌株，其特征在于，所述基因工程菌株具有如权利要求1所述的D-乳酸脱氢酶或如权利要求2-3中任一项所述的核苷酸序列编码的D-乳酸脱氢酶。
5.如权利要求4所述的基因工程菌株，其特征在于，所述基因工程菌中丙酮酸合成L-乳酸的途径被阻断，丙酮酸合成2,3-丁二醇的途径被阻断。
6.如权利要求5所述的基因工程菌株，其特征在于，所述基因工程菌中丙酮酸合成甲酸、丙酮酸合成乙酸和丙酮酸合成乙醇的途径中的一种或多种被阻断。
7.如权利要求5所述的基因工程菌株，其特征在于，所述起始菌为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)ATCC 14580的ΔhsdR1ΔhsdR2双突变菌株MW3。
8.如权利要求4所述的基因工程菌株，其特征在于，所述基因工程菌株是地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BN11，保藏号为CCTCC NO：M2016026，于2016年1月8日保藏于中国典型培养物保藏中心。
9.一种如权利要求4-8中任一项所述的基因工程菌株的制备方法，其特征在于，所述方法包括，使起始菌中的L-乳酸脱氢酶基因失活或缺失；引入如权利要求4或5所述的核苷酸序列。
10.如权利要求4-8中任一项所述的基因工程菌株的应用，其特征在于，在生产D-乳酸中的应用。
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