[发明专利]青蒿素及其衍生物在制备防治猪繁殖与呼吸综合征药物中的应用

说明书

本发明公开了青蒿素及其衍生物在制备防治猪繁殖与呼吸综合征药物中的应用。药理试验表明，青蒿素及其衍生物对感染猪繁殖与呼吸综合征病毒的细胞具有显著的保护作用，具有显著的抗猪繁殖与呼吸综合征病毒活性。青蒿素及其衍生物可以作为有效成分制备防治猪繁殖与呼吸综合征的新药，其应用前景广阔。

技术领域

本发明涉及兽医药物领域，具体涉及用于制备防治猪繁殖与呼吸综合征的药物。

背景技术

猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS)俗称“猪蓝耳病”，是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive andrespiratory syndrome virus，PRRSV)引起的一种在猪群中发生的新灾难性疾病，其临床表现为母猪严重的繁殖障碍，断奶猪普遍发生肺炎、生长迟缓以及死亡率增加，是一种高度传染性疾病。PRRSV属套式病毒目，动脉炎病毒科的单股RNA病毒，易发生基因重组，毒株交叉保护性低。其毒株分为欧洲株和美洲株，我国广泛流行的蓝耳病是美洲株变异引起的。该病既能垂直传染又能水平传播，能引起妊娠母猪发热、厌食、流产、早产、产木乃伊胎和弱仔，以及诱发仔猪和育成猪呼吸系统的多种疾病。

上世纪80年代末，PRRSV在美国首次被发现，之后迅速传播至全球大多数国家和地区，在全球呈地方性流行。我国1996年从猪流产胎儿中分离到了PRRS病原体；2006年，我国爆发了以仔猪高死亡率为特征的高致病性蓝耳病，使我国养猪业蒙受巨大损失，被列为我国一类动物疫病，并且疫苗防治效果并不理想。目前，高致病性蓝耳病的防控形势十分严重，该病毒易发生重组、免疫逃避逃逸等问题，容易激发继发猪瘟病毒、猪圆环病毒、猪流感病毒等感染，该病全球尚没有有效的控制方法，疫苗免疫是其主要的预防措施。但临床上使用PRRS疫苗主要存在的问题是：第一，疫苗产生免疫反应需要较长时间；其次，PRRSV疫苗并不具备完全的保护力，尤其是灭活疫苗不能激发细胞免疫；第三，PRRSV弱毒疫苗可以在免疫猪体组织中存在几周时间，并且从注苗猪向易感猪传播。近些年来，中药制剂的抗病毒作用已越来越受到人们的重视。

青蒿素是从黄花蒿(Artemisia annua L.)叶中提取得到的一种无色针状晶体，属倍半萜内酯化合物，其衍生物主要有双氢青蒿素、青蒿琥酯、蒿甲醚和蒿乙醚，分子结构如下所示：

青蒿素及其衍生物在临床上主要用于疟疾的治疗，也有报道其他用途，如抗炎、抗肿瘤、抗菌等药理活性。公开号为CN102755316A的专利文件公开了青蒿素及其衍生物在制备治疗丙型肝炎病毒药物中的应用，公开号为CN1711031A的专利文件公开了青蒿素、青蒿素类似物和一些蒿的粗提取物在治疗黄病毒科病毒(包括丙肝病毒、牛病毒性腹泻病毒和猪瘟病毒)引起的感染中的应用。目前对于运用青蒿素及其衍生物抗猪繁殖与呼吸综合征病毒的作用未见报道，也未见公开的相关专利。

发明内容

为解决现有技术的不足，本发明的目的在于提供青蒿素及其衍生物在制备抗PRRSV药物上的应用；本发明的另一目的是提供青蒿素及其衍生物在制备防治PRRS药物中的应用。

本发明的具体实验技术如下：

首先运用MTT法测定青蒿素及其衍生物对猴胚胎肾上皮细胞(Marc-145)和猪肺泡巨噬细胞(PAM)的毒性，确定安全浓度。然后通过建立PRRSV感染细胞模型，评价青蒿素及其衍生物对感染PRRSV的Marc-145细胞和PAM细胞的保护效果。评价手段主要为间接免疫荧光试验(IFA)、实时荧光定量PCR试验(Real-time PCR)以及蛋白免疫印迹试验(Westernblot)等。

本发明通过体外细胞试验发现青蒿素及其衍生物具有明显的抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒复制的作用，为通过药物防治猪繁殖与呼吸综合征提供了有力支持。