[发明专利]一种快速提取病毒RNA的试剂盒

说明书

本发明属于分子生物学检测领域，公开了一种快速提取流感病毒RNA的试剂盒，所述试剂盒包含病毒裂解结合液，所述病毒裂解结合液含有聚醚醇、蔗糖、Tris‑HCl；利用该试剂盒，只需一步操作即可使流感病毒的核酸释放出来，后续的物质可以用于荧光PCR的检测。

技术领域

本发明涉及分子生物学检测技术领域，更具体地，涉及一种快速提取病毒RNA的试剂盒。

背景技术

核酸提取是核酸检测整个技术流程的第一步，也是分子生物学中最关键的方法之一。它是下游核酸检测和科学研究的基础，抽提的核酸的质量及其完整性会直接影响临床研究或诊断的结果。一般的核酸提取过程包括两大步骤：样品的裂解和纯化。裂解指使样品中的核酸释放到反应体系中，纯化则是指使核酸与反应体系中的其它成分，如蛋白质、盐类以及其他杂质彻底地分离。常用的RNA的提取方法有TRIZOL法、异硫氰酸胍法、CTAB-LiCl法及国内外各生物公司的总RNA提取试剂盒等。RNA提取的经典方法是TRIZOL法，它是一种基于异硫氰酸肌/苯酚/氯仿抽提原理的方法，该法适用范围广，动植物都适用，提取的RNA基本无基因组DNA的污染，但是该法操作步骤繁琐，提取试剂中使用了苯酚、氯仿等有毒试剂，而且该法不适用于富含多糖多酚材料RNA的提取。CTAB-LiCl法常被用来提取植物组织RNA的提取，但是由于CTAB木身是一个与SDS功能相类似的试剂，尽管它可和RNA以及DNA形成不溶的复合物，但CTAB法通常要结合其它操作，如再经LiCl沉淀等步骤，使得该法操作繁琐，并且在抽提时使用有毒试剂氯仿。传统的提取试剂由于提取得率相对较低，且步骤较为繁杂，给提取工作带来一定影响，因此难以得到合格的RNA样品。

磁珠法是近几年才发展起来的核酸提取方法。磁珠的直径几十纳米至数微米，在磁场下表现出磁性，由无机/有机或者无机/无机材料组成的外形呈现为球状的复合粒子。磁珠法提取核酸不需要苯酚和氯仿等毒性大的有机溶剂，提取的核酸纯度高、产量大。专利号为201010281633.6、201510023368.4的专利公开了提取病毒DNA/RNA的方法，但这些试剂组成比较复杂，提取步骤比较复杂，提纯周期长，不利于客户快速提取纯化RNA。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服现有技术存在的上述缺陷，提供一种快速提取病毒RNA的试剂盒。

本发明的目的是通过以下技术方案予以实现的：

一种快速提取流感病毒RNA的试剂盒，所述试剂盒包含病毒裂解结合液，所述病毒裂解结合液含有聚醚醇、蔗糖、Tris-HCl。

本发明试剂盒的工作原理：样本在病毒裂解结合液的作用下，可以使病毒的结构发生改变，使病毒RNA释放出来。因此所述病毒裂解结合液不含抑制PCR反应的成分，所以产物可直接用于后续的PCR检测。

优选地，所述聚醚醇的浓度为10～14%（V/V）。

优选地，所述病毒裂解结合液的pH为6.5～7.5。

优选地，所述蔗糖的浓度为20～50mM，Tris-HCl的浓度为10～50mM。

作为一种具体的实施方式，所述病毒解裂结合液的组成为：20～50mM蔗糖，10～50mM三羟甲基氨基甲烷盐酸盐（Tris-HCl），10～14%（V/V）聚醚醇，溶剂为高压灭菌水（pH值为6.5～7.5）。

本发明还提供一种利用所述RNA试剂盒进行核酸快速提取检测的方法，是将样本于病毒裂解结合液混合，震荡室温静置5～10min后，取混合液进行PCR反应。

优选地，样本和病毒裂解结合液的混合体积比为1～1.5：1。

优选地，混合液在PCR反应体系中的体积不超过25%。